【摘 要】
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众所周知,应用一个世纪的铝佐剂并不能诱导机体产生有效的细胞免疫应答,因此对很多胞内感染和肿瘤的预防和治疗不能起到很好的作用。基于钙离子的脂质卷具有很多优点,包括稳定性高、运载性好和免疫佐剂性等。脂质卷是脂质体在阳离子介导下发生融合席卷而形成的,适当的阳离子都可以作为桥联剂。所以,我们用铝离子代替钙离子制备了以三价铝离子为桥联剂的脂质卷,并对其进行超声处理,使其可以被抗原提呈细胞有效摄取,从而诱导动
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众所周知,应用一个世纪的铝佐剂并不能诱导机体产生有效的细胞免疫应答,因此对很多胞内感染和肿瘤的预防和治疗不能起到很好的作用。基于钙离子的脂质卷具有很多优点,包括稳定性高、运载性好和免疫佐剂性等。脂质卷是脂质体在阳离子介导下发生融合席卷而形成的,适当的阳离子都可以作为桥联剂。所以,我们用铝离子代替钙离子制备了以三价铝离子为桥联剂的脂质卷,并对其进行超声处理,使其可以被抗原提呈细胞有效摄取,从而诱导动物机体产生特异性免疫应答。目的:考察不同的疫苗配方OVA-ALCO、OVA-CACO和OVA-AM的体内外免疫佐剂性能。实验方法:首先通过薄膜分散法制备纳米DOPS脂质体,然后分别加入氯化钙和氯化铝溶液制备CACO和ALCO（超声后）。通过动态光散射、倒置光学显微镜、透射电镜、红外光谱和小角散射对脂质卷进行表征;通过流式细胞仪和激光共聚焦显微技术来研究BMDCs对AM、CACO和ALCO的摄取程度及摄取机制;采用激光共聚焦显微镜记录BMDCs摄取AM、CACO和ALCO后有没有发生溶酶体逃逸现象;同时检测了不同微粒刺激后的BMDCs产生ROS的水平;通过皮下注射,分别给予雌性昆明小鼠OVA-AM、OVA-ALCO和OVA-CACO不同疫苗配方,三周后收集血清及脾细胞,检测抗体、细胞因子、脾细胞增值和T细胞分型的水平等。结果:通过透射电镜、红外光谱和小角散射说明铝脂质卷的成功制备。流式分析结果说明BMDCs对ALCO的摄取最好;共聚焦图像显示CACO和ALCO被BMDCs摄取后都发生了部分溶酶体逃逸现象;ROS检测结果说明了CACO和ALCO可刺激BMDCs产生较高水平的活性氧;脾T细胞分型检测结果表明,ALCO和CACO组诱导CD8+T和CD4+T细胞的产生最多。动物血清ELISA结果显示,与单独抗原OVA组相比,三种疫苗配方都可以诱导机体产生抗体免疫应答,其中ALCO和CACO组显著提高了细胞和体液免疫应答。结论:OVA是一种可溶性的蛋白,常被作为模型抗原,单独接种很难诱导机体产生适应性免疫应答,需要合适的免疫佐剂的辅助。本研究结果说明,ALCO和CACO可以显著提高疫苗的免疫效力包括诱导产生体液和细胞免疫,而传统的磷酸铝无法有效诱导杀伤性T细胞的生成,所以ALCO和CACO可以作为一种有效的免疫佐剂。
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