研究背景：　　轮状病毒（rotavirus，RV）是引起世界范围内＜5岁儿童腹泻的最重要病原体之一。以不同的动物实验对RV肠炎致泻的发病机制进行了广泛的研究，但仍未完全明确。我们研究组前期动物实验表明：回肠上皮细胞水通道蛋白（Aquaporin，AQP）AQP1mRNA的表达降低与肠腔内水的转运功能障碍、对水的吸收减少而导致的腹泻相关。而AQP家族中的哪些成员、如何参与轮状病毒肠炎的致泻过程，则有待进一步深入研究。　　研究目的：　　建立RV肠炎乳鼠动物模型；研究RV感染前后乳鼠肠道AQP1，AQP3，AQP4，AQP8蛋白的表达情况，探讨AQP是否参与RV肠炎致泻的发病机制。　　材料与方法：　　1．研究对象　　3-4日龄SPF级昆明乳鼠74只（许可证号：CXK(粤)12009-001），购自中山大学实验动物中心。　　2. RV病毒培养　　LLC-MK2细胞生长于含10％胎牛血清、200U/ml青霉素、200ug/ml链霉素的1640培养液中。　　接种病毒前，猴RV SAll用胰酶(终浓度为lOug/m1)按1：1的量混匀后放入37℃培养箱孵育1小时。吸附1小时后，加入含lug/ml胰酶的病毒维持液继续培养，接种病毒后第5天LLC-MK2细胞全部脱落，收获病毒冻存。TCID50法测定病毒滴度为1×107。　　3. RV肠炎动物模型的建立　　3-4日龄SPF级昆明乳鼠74只随机分成实验组与对照组各37只，实验组每只乳鼠予300μl TCID50为1×107的轮状病毒液灌胃，对照组每只乳鼠予300μl不含轮状病毒的细胞培养液灌胃。RV灌胃24h后评估腹泻状况，评分方法[1]：没有收集到大便不计分，正常大便1分，稀烂便2分，黄绿色稀烂便3分，水样便4分，≥2分表示有腹泻。　　4.大便RV抗原检测　　根据轮状病毒检测试剂盒操作，胶体金法检测大便RV抗原。　　5.标本采集及处理　　处死乳鼠，迅速各取对照组与模型组（RV肠炎组）在造模后腹泻高峰期第3天乳鼠1cm空肠、回肠组织，用10%甲醛固定后苏木精—伊红染色光镜下观察小肠粘膜的病理学改变；用2.5%戊二醛—锇酸固定、乙醇梯度脱水、环氧丙烷浸透、环氧树脂包埋、1um超薄切片、醋酸铀—枸椽酸铅染色后电镜下观察小肠上皮超微结构改变。　　取对照组与模型组造模后连续7天乳鼠2cm空肠、回肠、结肠组织，冰盐水冲洗干净后-80℃冰箱保存，western blot技术检测肠道AQP1、AQP3、AQP4和AQP8蛋白的表达。　　6.统计学分析　　统计数据以x±s表示，采用两独立样本t检验，P<0.05表示有统计学意义。　　结果：　　1．实验动物的临床表现及解剖结果　　RV肠炎组乳鼠病毒灌胃24小时后出现腹泻症状，表现为食欲不振、脱水、腹胀、水样便，3-4天症状最为严重，其中4只乳鼠RV灌胃后的第3-4天出现嗜睡，其余乳鼠仍能活动、饮食；腹泻对乳鼠体重无影响。对照组所有乳鼠均无腹泻症状，体重平均每天增加0.09g。　　处死乳鼠，剖开腹腔，RV肠炎组乳鼠肠粘膜见轻度充血、水肿，其中RV灌胃后第3-4天肠粘膜见有出血点；个别乳鼠肠管内见黄白色、黄褐色、褐绿色水样粪便堆积，含有未消化完全的凝乳状残渣。对照组乳鼠肠粘膜未见损伤。　　2．光镜下观察肠黏膜组织的病理学改变　　RV肠炎组病理改变为肠粘膜充血，绒毛轻度萎缩、坏死，小肠成熟绒毛上皮细胞空泡样变性，杯状细胞轻度增生，见有炎症细胞轻度浸润，粘膜下层水肿，绒毛轴心的血管扩张。对照组未见任何病理变化。　　3.电镜下观察肠道超微结构变化　　RV肠炎组电镜下小肠成熟绒毛上皮细胞空泡样变性，微绒毛排列稍紊乱或部分脱落，杯状细胞增生，上皮细胞顶部可见脂滴样结构，线粒体肿胀、溶酶体增多，而细胞间紧密连接未见结构改变。对照组小肠上皮未见任何改变。　　4. western blot检测肠道AQP1,AQP3,AQP4,AQP8蛋白的表达　　①对照组与 RV肠炎组乳鼠空肠、回肠、结肠黏膜均有AQP1、AQP3、AQP4、AQP8蛋白表达。　　②RV肠炎组回肠、结肠 AQP1蛋白表达量显著低于对照组（回肠：t=3.87,P＜0.01；结肠：t=2.55，P＜0.05）。　　③RV肠炎组结肠 AQP4、AQP8蛋白表达量低于对照组（AQP4：t=4.76，P<0.01；AQP8：t=3.37，P<0.05）。　　④RV肠炎组结肠AQP3蛋白表达量显著高于对照组（t=-4.83，P＜0.01）。　　结论：　　1.猴SA11株可成功感染昆明乳鼠，建立乳鼠RV肠炎模型。　　2. RV感染乳鼠后小肠组织出现轻微的病理改变，主要感染成熟绒毛上皮细胞。　　3. RV肠炎组乳鼠回肠AQP1、结肠AQP1、AQP4及AQP8表达下降，导致肠腔内转运水的功能发生障碍，对水重吸收减少，粪便稀薄而致腹泻，可能是轮状病毒肠炎致泻病理机制之一。　　4. RV肠炎组乳鼠结肠AQP3表达上升，通过反馈机制代偿性表达增加，AQP3参与肠道水分的重吸收适应性过程，减轻乳鼠腹泻、脱水症状。