第一部分：鼻息肉中抗金葡菌肠毒素IgE的检测及对超抗原假说的验证和分析 研究目的 1．寻找鼻息肉组织中金葡菌肠毒素存在并发生作用的证据。为鼻息肉发病的超抗原假说提供支持。 2．对鼻息肉病理生理过程中的“超抗原假说”进行理论分析。 研究方法 1．病例选择 前瞻性搜集我科从2005年3月到8月间入院手术的CRS病例100例。因为我们的目的在于验证‘超抗原推论’，因而挑选病例时尽可能选择伴发哮喘的病例。但只得到2例伴发哮喘者。因而我们挑选范围广泛，疾病表现较重，以复发性为主的患者列入研究。最后得CRS患者36人；其中CRS/NP者22例，单纯CRS者14例。 结 果 1)在42中，组织样本的荧光值都低于530RU(SIgE的最低阳性值-530RU)，M80组的荧光值范围为66～529RU，均值为179.29+110.69RU；M81组的荧光值范围为60～499RU，均值为165.29±106.72RU。 2)有8例组织样本的SIgE荧光值处于212～529RU之间(在鼻息肉组、单纯CRS组、对照组中分别为3:3:2)。是否确实为阴性，同法检测这8例病人其血清中的SIgE，结果均低于212RU(均值为118.34±62.20)。 3) 2例伴发哮喘的NPs病人中，组织抗．SEA和抗．SEB的SIgE的荧光值分别为159、132RU和135、118RU；均远低于最低阳性值。 4)组织总IgE浓度的范围为4.59～70.21，均值为17.72±14.13(单位为KU／L)。 5)外周血中总IgE水平的检测结果：均值为59.14+53.97，范围为 7.44～344.00KU／L。 6)组织中ECP浓度为39.13±61.93，范围为2.00到200.00(系统最大和最小 可测值，单位为lag／L)。 7)以上指标的各组间两两比较，只有ECP在NP组和对照组之间 P=0.032<0.05，有统计学差异。其余在NPs、CRS和对照组之间，SIgE的 荧光值、总IgE、ECP值没有显著性差异。 8)金葡球菌培养阳性3例(CRS／NPs组1例，CRS组2例)。 结论 在不伴持续性哮喘的鼻息肉病人中，没有发现金葡菌超抗原作用的证据，提示对‘超抗原假说’仍需要大量的临床调查和研究来论证。由于在我们的调查中，国人CRS和NPs病人中伴发重症哮喘的病人较少。以上结果可能间接证明了中国人NPs的发病与西方人有所不同。 第二部分：鼻息肉局部STAT4和STAT6的表达及其与细胞因子的关系 研究目的 1)研究信号转导和转录激活因子4和6(STAT4和STAT6)在伴或不伴鼻息肉的鼻窦黏膜炎症组织中的表达情况。 2)分别研究黏膜局部IL-4浓度与STAT6；IL-12浓度与STAT4表达之间的相关性。 病例和方法 1、病例选择 研究组：前瞻性搜集我科从2005年3月到8月间入院手术的鼻息肉和单纯鼻鼻窦炎患者36人。其中CRS／NP者22例，单纯CRS者14例。男女比为23比13。年龄介于14到71岁，中位数为28.78±24.50岁。根据血清SIgE检测结果(UniCAP系统，Phadiatop吸入性过敏原过筛试验)，变应性和非变应性病例各18例。 对照组：以12例无鼻病病史和体征的视神经挫伤或泪囊炎患者作为对照组。共有48例病人进入检测。 2．标本采取 为避免系统和局部用药物的影响，所有在入院前两周内有系统或局部用激素治疗史的病人均排除在外。入院当日即对所有病人在内镜下取近蒂部息肉组织两块，各约0.5cm<3>大小；一块用10％甲醛固定，备作组织学研究和观察，另一块置一80℃保存，备作ELISA检测细胞因子。无息肉病例取钩突黏膜。对照组病人取中鼻甲黏膜。 3．组织学研究 HE染色，光镜下观察。沿上皮下细胞浸润层选十个高倍视野计数嗜酸细胞，中性粒细胞和浆细胞。细胞数按自定的标准分级，每高倍视野大于五个为高嗜酸细胞。 4．免疫组化检查 5．EIJSA检测组织中IL-4和IL-12 6．统计学方法 统计分析采用SPSS11.5 for Windows 软件完成，所有数据均进行正态性检验。 结 果 1．STAT4的分布情况和计数结果 STAT4阳性的病例占总病例数的69.6％(25／36)。阳性细胞主要为淋巴细胞、大圆细胞。上皮细胞、腺细胞、嗜酸细胞和血管内皮细胞不表达STAT4。 STAT4在所有病例中的平均阳性细胞数4.33±5.37，范围为0～25.12(单位为个／高倍视野)。经过单样本资料K-S检验，STAT4阳性细胞在研究病例中的分布符合正态分布。 2．STAT6的分布情况和计数结果 STAT6阳性的病例占总病例数的94.4％(34／36)。阳性细胞主要集中在淋巴细胞、嗜酸细胞、大单核细胞中。上皮细胞、腺细胞、和血管内皮细胞不表达STAT6。 所有病例中STAT6阳性细胞的平均数为7.29±6.69，范围为0～35.50(单位：个／高倍视野)。经过单样本资料K-S检验，STAT6阳性细胞在研究病例中的分布符合正态分布。 3．炎症组织中STAT4和STAT6阳性细胞数的统计学对比 在炎症组织中STAT6阳性细胞数与STAT4阳性细胞数的对比结果：用两相关样本计量资料的Wilcoxon配对符号秩和检验Z=-3.958，P<0.005。提示STAT6的阳性细胞数显著高于STAT4阳性细胞数。 4．各分组之间STAT4和STAT6阳性细胞数的对比 5．STAT4和STAT6阳性病例在各组中的分布情况： 5．1STAT4： 三组中有阳性表达的病例比分别为：对照组为9.09％(1／11)；CRS组为50.00％(7／14)；CRS／NP组为81.82％(18／22)。 三组中有阳性表达的病例比分别为：对照组为36.36％(4／11)；CRS组为85.71％(12／14)；CRS／NP组为100.00％(22／22)。 在病变组和对照之间进行对比，四格表的卡方检验，结果表明病变组(CRS+CRS／NP)中STAT4阳性病例的构成比显著高于对照组(x<2>=12.417，P<0.005)：病变组中STAT6阳性病例的构成也显著高于对照组(x<2>=18.358，P<0.005)。 6．IL-4的检测结果及其与STAT6阳性细胞数的相关性 检测所得病变黏膜组织中IL-4的浓度为42.60±22.35，范围为16.15～111.25(单位pg／mL)。在病例资料中(CRS组+CRS／NP组)，作IL-4与STAT6阳性细胞计数的相关性检验，方法为两样本的Bivariate过程的Pearson相关法，结果r=0.430，P=0.009<0.05。表明两者有弱相关性。 7．IL-12的检测结果及其与STAT4阳性细胞数的相关性 炎症黏膜组织中IL-12的平均浓度为15.60±1.11，范围为0到45.50(单位pg／mL)。对在炎症组织中(CRS+CRS／NP)测得的IL-12的浓度与STAT4阳性细胞的数量进行Pearson相关性检验，结果r=0.741，P<0.005。表明在IL-12与STAT4阳性细胞之间有较强的相关性。 结论 1．STAT4和STAT6阳性细胞在鼻和鼻窦慢性炎症黏膜中均有表达，这与细胞因子检测结果一致；提示在CRS中同时存在着Th1型和Th2型反应。 2.在炎症组织中STAT6的表达数目显著高于STAT4，进一步确认CRS和NPs是一类以Th2反应占优势的黏膜炎症。根据上述的理论，推测CRS和NPs中以抗炎性反应为主。这也对CRS的感染性病因提出了疑问。 3.意料之中的是，STAT4和STAT6在病变组织中不管是均数还是阳性病例比都显著高于对照组。 4.STAT4的表达与IL-12的浓度表现较强的相关性。IL-12是已知唯一能够活化STAT4的细胞因子，本研究更确认了这一说法。但局部黏膜中IL-12的浓度处于较低水平，而STAT4阳性的细胞比例也较低，说明Thl型细胞在局部的分化应当是非常低的。 5.STAT6与IL-4的浓度有弱相关性，这可能提示了IL-4通过相应受体促进了STAT6蛋白的合成和激活，而由于IL-4并不是唯一能够激活STAT6蛋白的细胞因子，因此这种弱相关性是可以理解的。 6.在STAT6阳性细胞数与嗜酸细胞浸润程度之间有相关性。这一现象说明了STAT6与Th2反应的因果关系。由于IL-4的生物学行为是促进IgE和肥大细胞/嗜酸细胞-介导的反应，因而这一现象也说明STAT6与变态反应之间的内在联系。 本研究提示在CRS局部黏膜炎症中，STATs对细胞因子的生成和作用发挥着重要的作用。当然由于条件和时间限制，本研究仍处于初级水平。许多现象仍不足以得出结论，有待今后做深入的研究。