本研究以油（木奈）（Prunus salicina Lindl cv．Younai）为试材，进行了离体再生体系的研究和遗传转化的初步探索。离体再生体系方面，建立了一个优化的茎尖培养无性再生系统；建立了试管苗茎段直接再生不定芽的系统；进行了试管苗叶片、子叶和上胚轴再生不定芽的探讨。遗传转化方面，发根农杆菌介导转化试管苗茎段，诱导出了毛状根；根癌农杆菌介导ACO基因导入油（木奈）基因组，并获得再生芽苗。主要结果如下：1．茎尖培养无性再生体系的建立 取处于萌发生长阶段的油（木奈）枝条为接种外植体，消毒10min，20d后，外植体的成活率达56.7％；最佳诱导培养基为，外植体的分化指数达66.4％；最佳增殖培养基为，芽苗的增殖系数达4.5，芽苗最佳生长培养基为，单芽可在一代平均生长1.5cm；最佳生根培养基为，生根率可达100％。芽苗增殖培养基中添加医用粉剂，可完全抑制继代中产生的内生菌。2．茎段再生不定芽体系的建立 试管苗茎段诱导不定芽需要高浓度的细胞分裂素。茎段的最佳诱导培养基为，茎节基段、茎节中段和茎节上段的再生芽频率分别达100％、83.3％和62.5％，平均再生芽数分别达6.50、4.25和3.80；起始阶段的暗培养和有助于茎段不定芽的发生；茎节基段纵切后培养，不定芽的发生频率仍达100％，平均再生芽数达4.25。3．叶片、子叶和上胚轴再生不定芽的研究 诱导油（木奈）试管苗叶片再生不定芽，发生频率较低，本研究中最好的结果达13.3％，是以为诱导培养基获得的，平均再生芽数达4.0。 以油（木奈）子叶和上胚轴为起始外植体，外植体经不同的处理，不定芽再生情 福建农林大学硕士学位论文 摘 要 况有所差异。最佳诱导培养基为MS刊刀mg土”VBA刊刀mgL‘IAA，子叶纵 切片（表面刻伤）和子叶横切片（靠近子叶柄，表面刻伤）的再生芽频率分别 达 60．0o和 63．30，平均再生芽数分别达 3．ZI和 3．02。上胚轴横切段（］lgn插于 培养基）和上胚轴纵切片（切面朝下放置）的再生芽频率分别达76．3％和52．7％， 平均再生芽数分别达1．52和3．14。 4．发根农杆菌介导转化油棕诱导毛状根 发根农杆菌 M菌株和 R1601菌株对茎段的致根能力强于 R1000和 A菌株。 茎节基段作为转化受体远优于茎节上段、茎节中段或整株。M和R1601菌株以 直接接种法侵染茎节基段，茎节基段顺插于培养基时，毛状根的诱导率达57．4％ 和58．3％，平均毛状根数达3．29和2．71；茎节基段倒插于培养基时，毛状根的 诱导率达 55．6O和 62．50，平均毛状根数达 3．00和 2．53。M和 R1601菌株以共 感染法侵染茎节基段，毛状根的诱导率达 19石％和 17．8％，平均毛状根数达 3．20 和 294。本研究中由油棕诱导出的毛状根未充分表现出典型的毛状根特征，且 毛状根未能进一步发生分化。 5．根癌农杆菌介导ACO基因转化油捺 pBIFI和 pBIO．吕经双酶切和 PCR扩增，证明了 ACO基因分别己以正向和 反向的方式克隆到了中间表达载体pBllZI上。经PCR鉴定pBI08和pBIFI也 己经整合到受体菌LBA4404、EHA105和AGLI菌株中。并以含pBIO．8的菌株 介导 ACO基因转化试管苗叶片和茎段。经 100mg·L”欠an的连续筛选，筛选到 6株抗性芽苗。同时也表明：LBA4404是较适合于介导转化油棕的菌株，而且 菌液稀释4倍，侵染20ndn，黑暗下共培养3－sd也是较优化的转化条件。抗性 芽苗经GUS活性和PCR检测，3株被初步确定目的基因己整合到了其基因组 中。