人绒毛膜促性腺激素(humanchorionicgonadotropin，hCG)是由胎盘滋养层合体细胞合成和分泌的一种糖蛋白激素，在早期妊娠中起促进胚泡发育、维持妊娠的作用。因此，hCG疫苗最初作为一种理想的避孕疫苗而受到人们的重视。近年来的研究表明，绝大多数恶性肿瘤细胞能表达hCG类分子，并随着肿瘤细胞的进一步增殖扩散，其hCG的表达量会不断增加，在肿瘤细胞发生转移时其表达量达到最高值。研究表明，hCG在细胞转化、肿瘤血管生成、肿瘤转移和免疫逃逸中起重要作用。因此，hCG疫苗还可以用于恶性肿瘤的治疗。 hCG与TSH(促甲状腺激素)、FSH(促卵泡激素)、LH(黄体生成素)等同为糖蛋白激素家族，具有相同的Q亚基，其B亚基也与LH的β亚基有部分同源性，只有hCGB亚基羧基端109—145氨基酸残基组成的37肽(CTP)是hCG分子所特有的，并含有hCG的特异表位，其诱导产生的抗体具有更好的抗原特异性。其不足之处是CTP的分子量小，抗原性较差，产生的抗体中和hCG生物活性的能力低。我们曾通过基因重组的方法在毕赤酵母和大肠杆菌中成功地表达了CTP二聚体、三聚体、四聚体，并制备了相应的多克隆抗体，证明了hCGB-CTP37多聚体产生的抗体滴度高于单体产生的抗体滴度。 为了进一步提高hCGB．CTP37疫苗的免疫原性并减少疫苗的制备工艺，我们利用基因工程的方法在重组的hCGβ-CTP37多聚体的基因上连接了分子佐剂C3d基因的三聚体，并在其5’端连接了纯化标签6his基因，构建了hCGβ-(CTP)n(n=3，4)、hCGβ-(CTP)n(n=3，4)．3C3d四种重组蛋白的基因，然后克隆入载体pPIC9K得到表达质粒pPIC9Khis6(CTP)n(n=3，4)和pPIC9Khis6(CTP)n(n=3，4)3C3d，经限制性内切酶酶切鉴定及DNA测序确认序列及读码框正确后，电转入酵母细胞GS115。利用不同浓度的G418对转化子进行筛选，以得到含高拷贝目的基因的克隆。克隆经PCR鉴定后在甲醇诱导下进行表达。Westemblot分析结果表明成功表达了融合蛋白hCGp．(CTP)3、hCGβ-(CTP)4、hCGp．(CTP)3．3C3d、hCGp-(CTP)4-3C3d，其分子量分别为32kD、40kD、125kD和138kD左右。实际分子量与理论分子量相符。 蛋白纯化一直是蛋白表达领域的难点问题。我们对表达产物进行了一系列纯化方法的探索，并初步确立了有效的纯化步骤。我们依次使用了盐析、凝胶过滤和离子交换的方法对表达的融合蛋白进行了纯化，获得了初步纯化产品。为进一步研究其免疫原性和用作抗肿瘤疫苗奠定了基础。