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目的：雷公藤甲素也称雷公藤内酯醇(Triptolide，TP)是雷公藤的主要活性成分之一。实验证明，雷公藤甲素具有抗炎、免疫抑制和抗增殖作用。临床上常用雷公藤甲素治疗类风湿性关节炎，肾病综合症和支气管哮喘等，取得了显著的疗效。类风湿性关节炎(RheumatoidArthritis，RA)是一种病因未明的自身免疫性疾病，其病理学以炎症性改变为主要特征。在炎症反应中，特别是急性炎症反应中，中性粒细胞(polymorphonuclearneutrophil，PMN)无论从细胞数量和胞浆内细胞毒性颗粒的含量来讲都是处于炎症反应的核心位置。因此，炎症局部中性粒细胞的数量和功能关系到诸如RA等炎症性疾病的发生、发展和转归。白细胞介素8(Interleukin-8，IL-8)可以选择性诱导中性粒细胞、T淋巴细胞和嗜碱性粒细胞趋化，是关节炎症中趋化中性粒细胞的最强大的细胞趋化因子和活化因子，它在RA急性期促使大量的中性粒细胞聚集于炎症局部，是导致关节炎症的重要因素之一。聚集在炎症局部的中性粒细胞释放炎症介质、毒性氧基团、溶酶体酶等蛋白水解酶类，从而造成了自身组织细胞的损伤。在RA发生、发展的过程中，患者关节常常伴有滑膜成纤维细胞(synovialfibroblast，SF)的增生，过度增生的滑膜细胞可以侵入关节软骨和周围的组织，从而导致滑膜增厚甚至关节畸形等。这些增生的侵入性的SF在局部分泌大量的IL-8等炎症因子，趋化大量中性粒细胞进入局部关节，导致炎症进一步发展。因此，减少SF分泌IL-8等炎症因子可能是治疗RA等关节炎症的关键一步。雷公藤甲素具有抗炎、抑制免疫的作用，可以消除RA等病人的关节肿胀、疼痛，减轻局部的炎症反应，疗效显著。因此，有理由怀疑雷公藤甲素可能是通过抑制关节滑膜细胞产生IL-8等CXC趋化因子，降低了中性粒细胞进入关节的数量，减低了中性粒细胞的反应性，从而抑制了骨关节炎症的发生和发展。本研究从细胞外和细胞内的蛋白水平，探讨雷公藤甲素对体外培养的滑膜细胞在IL-18的刺激下产生IL-8的影响，从调节趋化因子角度去认识雷公藤甲素的抗炎机制。
方法：本研究运用临床截肢手术病人无炎症的骨关节滑膜组织进行培养，应用块状培养和酶消化培养，进而扩增和纯化细胞；运用HE染色对培养的骨关节滑膜成纤维细胞进行形态学观察；运用CD68和Vimentin的免疫组化对细胞进行鉴定；运用ELISA分别检测滑膜成纤维细胞对照组、IL-18处理组、雷公藤甲素预处理组和用雷公藤甲素预处理后IL-18处理组培养上清中IL-8浓度(2h，4h，6h，8h，16h，24h，6个不同时间段)，以及检测24h内不同浓度雷公藤甲素(0～100μg/L)影响IL-18刺激的滑膜成纤维细胞分泌上清中IL-8水平的变化；采用细胞免疫组化的方法分别检测滑膜成纤维细胞对照组、IL-18处理组、雷公藤甲素预处理组和用雷公藤甲素预处理后IL-18处理组中骨关节滑膜成纤维细胞(24h)内IL-8的表达水平。
结果：1.细胞培养与细胞鉴定：滑膜成纤维细胞经过传代3～5次后基本纯化，利用免疫组化鉴定Vimentin阳性99％以上，CD68阴性99％以上。2.IL-8表达水平的ELISA结果：(1)IL-18作用后，滑膜成纤维细胞分泌的IL-8的表达水平随时间的增加而增加，在8h左右分泌最快。(2)正常细胞对照组、雷公藤甲素组与IL-18处理组相比较IL-8的表达明显增加，统计学差异显著；同时，雷公藤甲素预处理后IL-18处理组中滑膜成纤维细胞分泌的IL-8的水平比IL-18组的IL-8分泌水平明显降低，统计学差异显著，并且可能在作用2h后雷公藤甲素就开始抑制IL-8的分泌。(3)雷公藤甲素剂量依赖性地抑制IL-18诱导的滑膜成纤维细胞分泌IL-8的水平，60μg/L雷公藤甲素可以使抑制作用达到最适。3.应用免疫组化方法检测雷公藤甲素在60μg/L时，不同处理组作用24h后细胞内IL-8的表达，实验结果利用IMAGE-PROPLUS软件系统测定细胞图片染色的免疫组化光密度值(immuno-histio-chemicalopticaldensity,IOD)，结果发现正常细胞对照组、雷公藤甲素组与IL-18处理组相比较IL-8的表达明显增加，统计学差异显著；同时，雷公藤甲素预处理+IL-18处理组中滑膜成纤维细胞分泌的IL-8的水平比IL-18组的IL-8分泌水平低很多，统计学差异显著。
结论：本实验证明了滑膜成纤维细胞表达Vimentin抗原，而不表达CD68抗原，这与以前的研究结果相一致。IL-18可以诱导骨关节滑膜成纤维细胞合成分泌IL-8。然而，雷公藤甲素则能够抑制IL-18诱导的骨关节滑膜成纤维细胞合成、分泌IL-8。IL-8是骨关节滑膜成纤维细胞早期释放的炎症因子，可以进一步促进中性粒细胞的黏附、聚集、释放炎性介质和延迟凋亡。因此，雷公藤甲素抑制IL-18诱导骨关节滑膜成纤维细胞产生IL-8，部分的抑制骨关节炎症反应的进一步发展，进而起到了一定的抗炎、抗类风湿作用。这种抑制局部趋化因子的产生而达到减少炎症局部炎症细胞数量的作用可能是雷公藤甲素抗炎、抗RA的重要机理之一。