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类风湿性关节炎（RA）是一种发病机制复杂的长期性以关节病变为主的自身免疫性疾病。它主要病理学变化是滑膜增生,持续性滑膜炎,血管翳形成,软骨及软骨下骨的破坏。滑膜增生是滑膜组织结构显著改变特征之一,是引起类风湿性关节炎关节破坏的重要原因。滑膜成纤维细胞（RASFs）在RA的病理进程中发挥着重要作用,被称为类肿瘤样细胞,其不受控制的增殖、迁移和对周围组织的侵袭直接导致了关节的损伤,最终使得关节功能丧失。因此,通常认为控制滑膜增生,积极寻找导致滑膜细胞过度增殖的原因是治疗该病的重点。RA另一典型特征是关节腔微环境伴随着胞外酸化,p H值通常在6.0以下。酸敏感离子通道1a（ASIC1a）是ASICs中一个研究最为广泛的亚基,它能被胞外H+激活,因介导Ca2+内流的独特活性而参与各种生理病理状况。研究表明ASIC1a在类风湿性关节炎中发挥重要作用,但是对于其在滑膜增生中的作用和调控机制了解甚少。此外,ERK/MAPK信号作为经典的增殖通路是否参与RASFs的增殖过程及其是否受ASIC1a的调控有待进一步研究。目的:1.本研究旨在探究RA滑膜成纤维细胞胞外酸化能否激活ASIC1a。42.探究激活的ASIC1a能否通过调控ERK/MAPK信号的激活来促进RA滑膜成纤维细胞的增殖。3.探究ASIC1a在体外、体内是否都发挥着促进RA滑膜成纤维细胞的增殖作用。4.了解ASIC1a对RA滑膜成纤维细胞增殖的影响,可能为ASIC1a作为类风湿性关节炎治疗的潜在靶点提供依据。方法:1.免疫组化法观察人滑膜组织病理变化以及滑膜增生情况收集人膝关节滑膜组织（其中正常例数n=3,RA患者例数n=25）,采用免疫组化染色法观察滑膜组织炎性细胞浸润、血管翳等病理形态的变化以及观察正常滑膜组织和RA滑膜组织中PCNA和Ki67的差异性表达以比较二者滑膜增生的变化情况。2.免疫组化法检测ASIC1a在人滑膜组织中的差异性表达用免疫组化以及免疫荧光法检测正常滑膜组织和RA滑膜组织中ASIC1a的差异性表达。3.观察ASIC1a在人正常滑膜成纤维细胞和RA滑膜成纤维细胞中的差异性表达首先采用贴壁法提取分离人正常滑膜成纤维细胞和RA滑膜成纤维细胞;其次采用流式细胞术检测滑膜成纤维细胞的标志膜蛋白CD55的表达以鉴定纯化实验所需细胞;最后采用Western blot法,q RT-PCR法,细胞免疫荧光法检测正常滑膜成纤维细胞和RA滑膜成纤维细胞中ASIC1a的表达差异。4.观察酸化激活的ASIC1a对RA滑膜成纤维细胞增殖的影响酸化（p H 6.0）刺激RA滑膜成纤维细胞0 h,1.5 h,3 h,6 h,12 h,24 h,用细胞免疫荧光,流式细胞术检测各个分组PCNA和Ki67的表达,用CCK8法检测细胞增殖率变化。5.探究沉默或过表达ASIC1a对RA滑膜成纤维细胞增殖的影响构建沉默或过表达ASIC1a细胞株以及使用ASIC1a特异性抑制剂Pc TX-1,实验分组为对照组、加酸组（p H 6.0）组、ASIC1a沉默组、Pc TX-1、ASIC1a过表达组,采用Western blot法,细胞免疫荧光以及集落形成实验检测各组细胞的增殖变化。6.探究酸化激活的ASIC1a通过ERK/MAPK信号通路促进RA滑膜成纤维细胞的增殖实验分组为对照组、加酸组（p H 6.0）组、ASIC1a沉默组、Pc TX-1、ASIC1a过表达组,采用Western blot法检测激活的ASIC1a对c Raf,ERK活化状态的影响;然后使用ERK抑制剂U0126,采用Western blot法、集落形成实验以及CCK8法观察各分组细胞增殖现象。7.探究ASIC1a在体内对滑膜组织增生的影响体内实验采用佐剂性关节炎（AA）大鼠模型进一步研究ASIC1a对RA滑膜组织增生的影响。动物分组为正常组、AA组、ASIC1a特异性抑制剂Pc TX-1组（0.5μg/kg,1μg/kg,2μg/kg,造模成功后给药3天每次,共8次）、阳性药曲安奈德组（TA,1 mg/kg造模成功后给,药3天每次,共8次）。采用苏木精-伊红染色观察各动物分组滑膜组织病理状况;免疫组化法观察各组PCNA和Ki67的表达。结果:在RA患者滑膜组织和滑膜成纤维细胞中及AA大鼠滑膜组织中,ASIC1a的表达显著增加。此外,细胞胞外酸化使PCNA和Ki67表达显著增加,并且这种现象能被Pc TX-1或ASIC1a-sh RNA取消,说明胞外酸化通过激活ASIC1a促进RA滑膜成纤维细胞的增殖。p-c Raf和p-ERK的激活也可以被Pc TX-1或ASIC1a-sh R NA阻断,且使用ERK抑制剂（U0126）可进一步抑制RA滑膜成纤维细胞的增殖,表明ERK/MAPK信号有助于ASIC1a促进RA滑膜成纤维细胞的增殖过程。结论:1.ASIC1a促进RASFs的增殖;2.ASIC1a通过调控ERK/MAPK信号通路促进RASFs的增殖。