Rho-ROCKⅡ的抑制剂促进大鼠脊髓损伤后功能恢复的实验研究

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目的:观察ROCKⅡ抑制剂Y-27632对脊髓损伤后轴突再生与功能恢复的影响。方法:(1)选择健康雌性成年SD大鼠140只,随机分成4组,每组35只,其中A、B、C三组的大鼠用WD法制成Ts-T1o平面以下完全性截瘫的脊髓损伤模型,同时在L4平面的蛛网膜下腔植入注药用的软导管, D组仅咬开椎板,不损伤脊髓。A组为Y-27632治疗组,B组为PBS治疗对照组,C组为空白对照组,D组为假手术组。(2)A、B组于伤后1h开始,分别用微量注射器注入12μL的Y-27632和PBS,每天一次,共14天,C、D组未作处理。(3)各组:术后8、24、168 h各组分别进行HE染色和TUNEL染色观察,并计算凋亡细胞数;术后1d、1、2 w观察生长相关蛋白-43的表达;术后3,8w作体感诱发电位观察潜伏期和波幅;术后第6w用脑立体定位仪在大脑运动感觉皮质区注射示踪剂,术后8w顺行示踪观察各组轴突的生长情况;3、6、8w作BBB评分。(4)各项统计指标用x±s表示,应用SPSS13.0统计软件作单因素方差分析。结果:(1)HE染色:A组与B、C组相比,24小时后,神经细胞与胶质细胞数量更多,变性细胞及红细胞数量明显更少;组织水肿和空洞形成也较轻。(2) TUNEL法测定凋亡细胞数:8h时,A、B、C、D组分别为50.5±4.70,58.9±2.46,58.5±2.1,8.3±1.44;24h时,分别为45.0±4.00,55.4±4.94,54.5±3.11,8.3±1.44;168h时,分别为9.9±1.58,15.7±1.50,15.6±1.68,8.3±1.44。各时间段A组与B、C、D组比较均有统计学意义,B、C组间比较均无统计学意义,B、C组分别与D组比较均有统计学意义。(3)生长相关蛋白-43的表达:1d时,A、B、C、D组分别为76.9±3.71,43.3±3.99,42.3±4.77,37.3±2.69;1w时,分别为104.9±3.83,70.1±3.57,68.2±3.34,37.3±2.69;2w时,分别为159.1±4.73,94.5±3.91,96.13±3.56,37.27±2.69。各时间段A组与B、C、D组比较均有统计学意义,B、C组间比较均无统计学意义,B、C组分别与D组比较均有统计学意义。(4)体感诱发电位潜伏期:3w时,A、B、C、D组分别为30.2±0.57,36.0±1.41,35.9±0.89,14.5±0.79;8w时分别为23.1±1.52,28.5±1.27,27.9±1.43,14.5±0.79;波幅:3w时分别为3.58±0.084,14.18±1.604,1.64±0.089,1.32±0.1928w时分别为6.80±0.274,3.00±0.339,2.80±0.374,14.18±1.604。各时间段A组与B、C、D组比较均有统计学意义,B、C组间比较均无统计学意义,B、C组分别与D组比较均有统计学意义。(5)荧光顺行示踪:8w时,A、B、C组分别为74.8±22.49,35.0±1.58,33.7±1.30。A组与B、C组比较有统计学意义,B、C组间比较无统计学意义。(6)BBB评分:3w时,A、B、C组分别为8.4±0.99,5.0±0.85,5.2±0.86;6w时分别为9.8±1.15,5.6±1.18,6.1±0.74;8w时分别为12.6±1.40,7.9±1.06,7.9±0.96。A组与B、C组比较有统计学意义,B、C组间比较无统计学意义。结论:Rho-ROCKⅡ抑制剂Y-27632能减少神经损伤后的继发性损伤,促进损伤轴突再生,有利于脊髓损伤后神经功能的恢复。
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