论文部分内容阅读
为探索构建具有多功能、高活性，可显著增加免疫调节范围、增强免疫效应的新型细胞因子基因，获得融合蛋白，本实验应用PCR技术对猪的IL-6和IL-4基因分别加以改造。去除IL-6的终止密码子，并在两端引入BamHⅠ和SalⅠ酶切位点，去除IL-4的起始密码子，并在两端引入SalⅠ和XhoⅠ酶切位点，同时在二者之间加上Gly-Ser-Ser-Thr柔性连接肽序列，克隆PGR产物，并构建了pGEX-4T-1-IL6／IL4原核表达载体，经BamHⅠ，SalⅠ和XhoⅠ酶切鉴定，证实IL6／IL4融合基因已克隆到原核表达载体pGEX-4T-1，为进一步研究其诱导表达条件及生物学功能奠定了基础。 将已构建的II-6／IL-4融合蛋白表达载体质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，用2×YTA培养基培养，以IPTG诱导融合蛋白表达，并作RT-PCR及SDS-PAGE分析转录及表达情况；融合蛋白的表达产物以，包涵体形式存在，将包涵体经过变性，稀释、透析复性处理后用MTT法测定重组蛋白刺激猪淋巴母细胞增殖反应活性。RT-PCR结果显示，该融合蛋白能在大肠杆菌中正确转录，经SDS-PAGE分析表达蛋白分子量为64KD，与相同浓度的重组猪IL-6和IL-4比较，经复性处理的融合蛋白促进猪淋巴母细胞增殖反应活性显著增强。表明我们所构建的IL-6／IL-4融合蛋白是一种新型高效免疫调节分子，可望进一步研制成新的高效免疫增强制剂。