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目的:1、探讨Kiss-1基因过表达对结直肠癌细胞增殖能力、侵袭和迁移能力的影响。2、探讨Kiss-1基因在结直肠癌细胞中的相关信号传导通路。3、分析Kiss-1基因抑制结直肠癌转移能力的可能相关机制。方法:1、应用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)方法从结直肠癌细胞株SW480、SW620、HCT116、HT-29、LOVO中筛选出Kiss-1基因m RNA的表达水平均相对较低者,备用。2、通过构建携带Kiss-1基因的慢病毒载体,并感染Kiss-1基因相对低表达细胞株,使其成为稳定过表达细胞株,并将原株细胞、空载体细胞、Kiss-1基因稳定过表达细胞株分别分为:空白对照组(CON组)、阴性对照组(NC组)、过表达组(OE组)。3、采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)和Transwell小室法分别检测Kiss-1基因转染前后细胞的增殖能力、侵袭及迁移能力的变化。4、应用Western-blot法检测三组细胞中MAPK信号通路的关键分子—丝裂原细胞外激酶(mitogen extracellular kiase,MEK)表达含量的变化以及下游效应蛋白肌球蛋白轻链(myosinregulatory light chain,MLC)磷酸化水平的变化。5、应用Western-blot法检测三组细胞中NF-kB信号通路中抑制性蛋白I-kB以及下游效应蛋白基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达含量的变化。结果:1、在SW480、SW620、HCT116、HT-29、LOVO人结直肠癌细胞株中,经q RT-PCR结果显示,在此5株结直肠癌细胞株中Kiss-1基因表达丰度均为中,但是Kiss-1基因在HCT116细胞株中表达量相对较少(P<0.01)有统计学意义。2、HCT116细胞通过慢病毒转染之后,报告基因增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)能够稳定表达,荧光率均>80%,Kiss-1基因转录产物m RNA及其蛋白Metastin的表达水平均明显升高,均具有统计学意义(P<0.05)。3、Kiss-1基因转染成功过表达后(OE组),CCK-8法检测,显示细胞增殖能力明显下降,有统计学意义(P<0.05);Transwell小室结果表明,细胞的侵袭及迁移能力亦明显下降,均有统计学意义(P<0.05)。4、Western blot检测结果显示,OE组细胞MEK表达含量下降,MLC的磷酸化水平亦明显下降,与CON组NC组之间均有明显差异,具有统计学意义(P<0.05)。5、Western blot检测结果显示,OE组细胞抑制性蛋白I-?B的表达含量明显升高,而MMP-9的表达含量却明显降低,与CON组NC组之间均有明显差异,具有统计学意义(P<0.05)。结论:1、Kiss-1基因转染人结直肠癌HCT116细胞后能够稳定过表达,并且能够明显抑制细胞的增殖能力、侵袭和迁移能力。2、Kiss-1基因抑制结直肠肿瘤的增殖能力、侵袭和迁移能力与MAPK信号传导通路相关,可能通过下调下游蛋白MLC的磷酸化水平而发挥作用。3、Kiss-1基因抑制结直肠肿瘤的增殖能力、侵袭和迁移能力与NF-?B信号传导通路相关,可能通过下调下游蛋白MMP-9的表达而发挥作用。4、Kiss-1基因抑制结直肠肿瘤的增殖能力、侵袭和迁移能力过程可能有多条信号传导通路的参与。