论文部分内容阅读
研究背景阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)是一种中枢神经系统退行性疾病,主要特征为进行性认知功能障碍和行为损害,临床表现为记忆力下降、视空间能力损害、失语、失用、失认等。AD的发病机制较为复杂,大量研究证实,AD与内质网应激(Endoplasmic reticulum stress, ERS)有密切关系,ERS被认为是其重要的发病机制之一。TRB3(又叫TRIB3、NIPK、SINK、SKIP3)是果蝇Tribbles的哺乳动物同源蛋白家族中的一员,其基因于1999年在研究神经细胞凋亡时被发现。TRB3是ERS中的关键因子,在各种不同原因引起的ERS时,TRB3可被诱导增多。ERS激活ATF4-CHOP通路,TRB3位于ATF4-CHOP通路下游,是ATF4-CHOP通路上的一个靶点,并且TRB3介导了ATF4-CHOP通路诱导的细胞凋亡。然而TRB3在AD中的表达情况尚无报道。研究目的研究内质网应激因子TRB3在不同月龄APP/PS1转基因小鼠脑内的表达情况,并阐明TRB3与阿尔茨海默病病情进展的关系。研究方法1实验分组选取3月龄、7月龄APP/PS1转基因小鼠,同月龄野生型(Wild Type, WT) C57/BL6J小鼠作为对照,将小鼠分为3月龄WT组、3月龄APP/PS1组、7月龄WT组、7月龄APP/PS1组,每组各10只小鼠。2 Morris水迷宫检测主要分为定位航行实验和空间探索实验两部分,测量小鼠潜伏期时间、穿越平台所在位置的次数以及在平台所在象限的停留时间。3 TRB3的检测行为学实验完成后,处死小鼠。采用免疫组织化学及Western blotting方法研究TRB3在小鼠脑内的表达情况。实验结果1小鼠行为学实验3月龄APP/PS1组小鼠潜伏期时间、穿越次数及停留时间与同月龄WT组小鼠比较,差异均无统计学意义(P□0.05)；而7月龄APP/PS1组小鼠潜伏期时间、穿越次数及停留时间与同月龄WT组小鼠比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。该结果提示7月龄APP/PS1组小鼠存在空间学习及记忆能力的下降,出现了AD的主要症状。2 TRB3在各组小鼠脑内的表达2.1免疫组织化学结果TRB3主要在大脑皮层表达。TRB3在3月龄及7月龄APP/PS1组小鼠脑内的表达水平与同月龄WT组小鼠比较,差异均有统计学意义(P<0.05),且TRB3在7月龄APP/PS1组小鼠脑内的表达水平与3月龄APP/PS1组小鼠比较,差异有统计学意义(P<0.05)。2.2 Western blotting结果TRB3在不同月龄及不同基因型小鼠脑内的表达情况与免疫组化结果基本一致。TRB3在3月龄及7月龄APP/PS1组小鼠脑内的表达水平与同月龄WT组小鼠比较,差异均有统计学意义(P<0.05),且TRB3在7月龄APP/PS1组小鼠脑内的表达水平与3月龄APP/PS1组小鼠比较,差异有统计学意义(P<0.05)。实验结论TRB3在APP/PS1转基因小鼠脑内表达增多,且TRB3表达水平的增多可能与阿尔茨海默病的病情进展有关。