目的观察铁超载条件下Ndfip1过表达对神经细胞生存率的影响,明确Ndfip1对神经细胞的保护作用;检测铁超载条件下Ndfip1过表达对神经细胞内的活性氧水平、丙二醛含量、凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax表达以及凋亡终末执行酶Caspase-3表达的影响,探讨Ndfip1对神经细胞的保护作用机制。方法将实验组SH-SY5Y细胞用Ndfip1质粒转染,对照组SH-SY5Y细胞被空质粒转染。首先,在细胞转染48 h后使用蛋白印迹法检测实验组与对照组细胞的Ndfip1蛋白表达量,以确定转染效率。使用MTT比色法检测SH-SY5Y在不同浓度（0、50、100、200、500μM）硫酸亚铁作用下的生存率,以明确铁离子超载的浓度。其次,在铁离子超载条件下,运用MTT比色法测定实验组与对照组细胞的生存率,分析Ndfip1过表达与神经细胞生存率之间的关系,以明确其是否对神经细胞产生保护作用。最后,在铁离子超载条件下,应用试剂盒检测实验组和对照组细胞的氧化应激反应指标ROS水平和丙二醛含量的变化,分析Ndfip1过表达与氧化应激反应之间的关系;通过蛋白印迹法测定细胞凋亡调控蛋白Bcl-2和Bax的蛋白表达量,分析Ndfip1过表达与细胞凋亡调控因素之间的关系;应用蛋白印迹法检测凋亡终末执行酶Caspase-3的蛋白表达量,分析Ndfip1过表达与细胞凋亡执行因素之间的关系,从而探讨Ndfip1对神经细胞的保护作用机制。结果细胞经质粒转染48 h后,蛋白印迹法检测结果显示实验组细胞Ndfip1表达量比对照组明显增加,说明质粒转染和细胞模型构建均成功完成,可用于后续实验。MTT法检测结果显示,细胞的生存率伴随着FeSO₄浓度的不断增加逐渐降低。其中,200μM FeSO₄处理后细胞生存率明显降低（P<0.01）,此浓度可作为后续铁离子超载的实验浓度。应用200μM FeSO₄处理实验组和对照组细胞,实验组细胞生存率比对照组的细胞生存率明显提高（P<0.05）,以此可知Ndfip1能够对抗铁离子超载诱导的神经细胞凋亡,对神经细胞具备保护作用。ROS荧光探针检测结果显示,实验组细胞内荧光强度显著弱于对照组细胞内的荧光强度,说明实验组细胞内ROS减少。丙二醛含量测定数据表明,实验组细胞较对照组相比丙二醛含量显著减少,表明实验组细胞内的脂质过氧化物减少,氧化应激水平降低。蛋白印迹法检测结果显示,实验组细胞与对照组细胞相比Bcl-2表达增加,即细胞凋亡的抑制作用增强;Bax蛋白表达减少,即细胞凋亡的促进作用减弱;Caspase-3表达减少,即凋亡酶减少,从而使神经细胞凋亡减少,说明实验组细胞凋亡受抑制。结论1、Ndfip1可以减轻铁离子超载诱导的神经细胞凋亡,提高细胞生存率,具有保护作用。2、Ndfip1对神经细胞的保护作用可能是通过减轻细胞内氧化应激反应,抑制线粒体凋亡途径实现的。