目的比较不同程度缺血及不同复灌注时间引起的睾丸微血管的损伤改变,研究携抗基质金属蛋白酶-9抗体脂质微泡(TMB-9)在兔睾丸不同程度缺血再灌注损伤中的评价,寻求一种更能客观、直接评价睾丸微血管损伤的无创方法。方法制备普通脂质微泡(MB)及携抗基质金属蛋白酶-9抗体脂质微泡(TMB-9)并检测其相关声学特性。将54只成年健康大白兔随机分成对照组(S组)、轻度缺血复灌注组(R1、R2、R3、R4组),中度缺血复灌注组(R1’、R2’、R3’、R4’组)共9组,每组6只。随机选择一侧睾丸,于睾丸上方2cm处完全结扎精索建立睾丸缺血模型,肉眼可见阴囊壁变黑,彩超监测下示睾丸血流量完全消失,其中R1、R2、R3、R4组分别缺血2h后,复灌注2h、6h、12h、24h,建立睾丸微血管轻度缺血不同复灌注程度模型;R1’、R2’、R3’、R4’组分别缺血4h后,复灌注2h、6h、12h、24h,建立睾丸微血管中度缺血不同复灌注程度模型。S组暴露精索后穿线但不结扎。术前、术后每组分别进行双侧睾丸MB及TMB-9超声造影,运用超声造影量化分析技术分析各组造影参数:峰值强度(PI)、达峰时间(TP)、曲率(Slope)、平均渡越时间(MTT)、峰值减半时间(DT/2)和曲线下面积(Area)的变化以及两种脂质微泡之间的区别。各组术前及造影结束后,在彩超引导下经心脏穿刺取血3ml,实验室检测血浆血管性血友病因子(v WF)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)含量。术后取术侧睾丸,多点取材,行HE染色及免疫组织化学染色检查(基质金属蛋白酶MMP-9),对比观察各组病理变化以及组间区别。使用SPSS13.0软件进行统计学分析,所有数据均以x±s表示,两组数据间的比较采用两独立样本t检验。差异性检验水准设为P<0.05(双侧)。结果脂质微泡造影剂为乳状白色稠状液体,光镜下可见粒径约为3-5μm,分布较均一的圆形微泡,室温下静置30min后,可出现分层,微泡变大、数量减少,24h后液体变澄清,几乎未见明显微泡。术前各实验组、对照组间术侧睾丸超声造影(MB组及TMB9组)各参数无明显差别(P>0.05)。轻度缺血组,TMB9组中,R1组较S组患侧PI、Slope、Area明显增加(P<0.01),MTT、DT/2明显延长(P<0.01),TP明显缩短(P<0.01)。随着复灌注时间延长,PI、Slope、Area逐渐降低(P<0.05),TP、MTT、DT/2逐渐增加(P<0.05)。TMB9组较MB组PI、MTT增加(P<0.05),DT/2、Slope、Area显著增加,TP明显降低(P<0.01)。中度缺血组,TMB9组中,R1’组较S组PI、Slope、Area明显增加(P<0.01),DT/2延长(P<0.05),TP减少(P<0.01)。随着复灌注时间进一步延长,PI、Slope明显降低(P<0.01)、Area减少(P<0.05),TP、DT/2、MTT明显延长(P<0.01)。TMB9组较MB组PI显著增加,Slope、DT/2、MTT、Area显著增加,TP明显降低(P<0.01)。术前各组间血浆v WF、NO、ET-1含量均无统计学差异(P>0.05)。术后各实验组血浆v WF、NO、ET-1含量均较S组显著增高(P<0.01)。在轻度缺血复位早期(R1及R2组),v WF、NO、ET-1逐渐升高,R3组中ET-1含量最高。中度缺血组中,随着复灌注时间延长,ET-1,NO水平逐渐升高(P<0.05)。睾丸病理检查结果:S组睾丸间质微血管未见扩张,未见出血、血栓形成;轻度缺血组及中度缺血组中,随着复灌注时间延长,睾丸微血管扩张充血明显,腔内可见血栓形成,管腔及间质内炎症细胞浸润增多,管壁玻璃样变性,微血管基底膜MMP-9表达逐渐增多,间质水肿逐渐加重。结论携抗基质金属蛋白酶-9抗体脂质微泡(TMB-9)比普通脂质微泡(MB)能够更好地评价睾丸微血管损伤的程度。不同缺血时间与不同复灌注时间会引起不同程度睾丸微血管的损伤改变。