小反刍兽疫病毒疫苗株与4系野毒株RT-PCR鉴别方法的建立及岩羊分离株的基因序列分析

来源 :青岛农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:brianwang1982
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
小反刍兽疫(Peste des Petits Ruminants, PPR)由副粘病毒科麻疹病毒属的小反刍兽疫病毒(Peste des Petits Ruminants virus, PPRV)引起,以发热,眼、鼻有大量浆性分泌物、溃疡和坏死性口腔炎,胃炎,腹泻和肺炎为特征的一种严重的烈性、接触性传染病。主要感染小反刍兽,特别是山羊和绵羊高度易感。PPR严重威胁着动物卫生安全和畜牧业的发展,是需要采取严厉的强制预防,控制和扑灭的动物疫病之一。2007年7月,我国西藏自治区阿里地区日土县发生PPR疫情,这是我国首次发生PPR。疫情发生后,立即对疫区及周边地区的绵羊、山羊接种小反刍兽疫Nigeria75/1疫苗进行预防免疫,但是弱毒株的存在可能会干扰PPR的血清学调查,导致无法与野毒感染进行区分。   针对上述情况,本研究采用根据H基因的多变区域设计特异性引物H1a/H2b联合OIE规定的基于N基因检测PPRV的标准通用引物NP3/NP4,建立区分PPRV野毒株与疫苗株的联合RT-PCR方法。结果表明,针对N基因的RT-PCR方法能同时检测PPRV野毒株与疫苗株;而针对H基因的RT-PCR方法只能检测PPRV4系野毒株,不能检测PPRV疫苗株。根据2次RT-PCR反应的结果,能够很好的区分PPRV4系野毒株与疫苗株。而且可检测到的最低模板量可达7.7×10-3 ng/μl,该值完全可以满足作为诊断方法的要求。总之该检测方法可以成功的扩增出国内流行的毒株,专一性好,灵敏度高,准确度高,因此有潜力用于兽医临床上小反刍兽疫病毒疫苗毒与野毒的鉴别诊断。   根据Genbank中发表的PPRV基因序列,我们设计14对扩增引物、91条测序引物运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获取了覆盖岩羊分离株(简称Tibet/07-Y)全基因组的14个重叠片段。病毒RNA的5’及3’端的序列通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)获取。该Tibe/07-Y分离株全长为15948bp与已发表的PPRV毒株序列长度相同,全基因组编码6种结构蛋白,各个蛋白的基因起始、终止序列在进化上的保守性很高。与PPRV基因4系毒株PPRV/China/Tibet/Geg/07-30(简称Tibet07-30)、Turkey2000,基因2系毒株Nigeria75/1与Nigeria76/1,基因1系毒株C(o)te d Ivoire89的核苷酸同源性分别为99.7%、92.6%、89.5%。   对Tibet/07-Y的H基因进行分子生物学特征分析,发现H基因由1957个核苷酸组成,编码区有1830个核苷酸共编码609个氨基酸,与其他PPRV分离株核苷酸和氨基酸序列同源性分别为88.6%-99.7%和89.3%-99.7%。与麻疹病毒属的其他病毒的核苷酸和氨基酸同源性为46.2-54.8%和33.4-55.2%。H蛋白的疏水区高度保守,N末端锚定区由38-58个氨基酸组成。H蛋白含有13个半胱氨酸残基、37个脯氨酸及四个潜在的N-糖基化位点,分别命名为N172 KSK175、N215 VSS218、N279MSD282、N18KTH21。
其他文献
摘 要: 面临职业学校生源素质急剧下降的现实,如何进行数控专业教学改革成为本校乃至所有中等职业学校必须认真思考并解决的问题。针对学生差异悬殊的实际,作者在数控车教学中实施同班教学、分层提高、共同发展、分层达标的教学策略,解决了教学改革中遇到的矛盾并满足了职业学校学生的需要,使每一位学生都学有所获。  关键词: 职业学校 数控 课程改革 分层教学 教学效果    一、分层教学的提出  目前,面对学生
文章认为,称职的大学体育老师必须做到大胆教学、敢于借鉴、善于总结,言传与身教并重。 The article holds that a competent college physical education teacher must mak
离散是近年来族裔文学研究的一个重要内容。美国华裔作为一个离散群体,在文化身份认同方面表现出离散文化的特点。本文从离散理论的视角研究美国华裔作家任碧莲的《梦娜在希
在《红楼梦》众多的人物当中,王熙凤绝对是一个重要的人物。她惹人喜爱,也遭人痛骂,正如王昆仑先生所言:“《红楼梦》的读者恨凤姐,骂凤姐,不见凤姐想凤姐。”王熙凤何以具有如此巨大的魅力,王熙凤的性格特征是什么?本文对此略作探讨。  一、聪明机敏,精明能干  王熙凤缺乏文化教养,识字不多,第二十八回让宝玉记账可为证,但她天资聪明,金陵王家的熏陶,荣国府的锤炼,使她形成了行事机敏、精明干练的性格。  (一
借助线性回归方程建立了土状赤铁矿矿石选别的模拟模型。应用这些方程式能够确定具有良好统计学精度的关于一些参数(生产率、矿浆浓度以及精矿截取缝宽度)影响单段赖克特圆锥
Nesfatin-1,是一种核组蛋白NUCB2派生前体的神经肽,结构上由82个氨基酸构成。NUCB2,作为nesfatin-1的前体,在结构上由含24个氨基酸的信号肽和含396个氨基酸的蛋白构成,这些氨
范仲淹的《岳阳楼记》是一篇脍炙人口、传诵千古的散文名篇。全文仅455字,但内容博大,哲理精深,语言铿锵,不愧为千古绝唱。一、超卓的立意屈原愤世嫉俗而投汨罗江,可谓悲壮;
摘 要; 本文通过梳理美国语言学历史的四个阶段中几个著名语言学家思想的形成及发展过程,逐层分析欧洲传统语言学思想对他们的影响,从而得出结论:美国语言学在继承欧洲语言学的基础上进行了创新,走出了一条推陈出新的道路。  关键词: 美国语言学 欧洲语言学 影响    一、美国的语言学传统与欧洲的传统有很大不同,但又有重要联系。  欧洲有两千多年的语言研究历史,美国的语言学则开始于十九世纪二十世纪初。在欧
摘 要: 柏拉图哲学著作中充斥着神话寓言故事,该如何解读这些故事一直是近来柏拉图研究的焦点。本文以《理想国》为例,试图以“寓言”定义这些故事,并分析每个故事的表面意义和寓言的隐含意义。  关键词: 柏拉图《理想国》 寓言故事 表面意义 隐含意义    柏拉图《理想国》中寓言故事在哲学著作中的穿插,尤其是作为哲学家的柏拉图在作品中明确批判了荷马等人的神话故事和密托斯的非理性思维论证方式。那这些故事究
日语V-V复合动词的词义对于学习者来说较难准确把握,它不完全是前后两项动词的词义相加,作为前项或后项的动词,在复合动词中,除了有其本身的各义项外,不仅自身会发生意义改变