诺如病毒（Norovirus,NoV）是一种重要的人畜共患病病毒,可感染人、猪、犬、牛、猫及啮齿类动物。诺如病毒属于杯状病毒科,是一种由单链正义RNA基因组组成的非包膜病毒。目前将诺如病毒分为10个基因群（GI-GX）。这些基因群进一步细分为49种以上的基因型。基因组GI,GⅡ和GIV可感染人。自2002年以来,GⅡ基因型4（GⅡ.4）成为疫情中检出最多的基因型,与全世界范围内的大量AGE病例相关。然而,自2014年以来,GⅡ.17基因型受到更多关注,因为该基因型已从亚洲传播到其他国家。2016年冬季,GⅡ.P16/GⅡ.2基因型在亚洲国家广泛流行。本文通过诺如病毒原核表达蛋白制备、ELISA检测方法建立诺如病毒病毒样颗粒的纯化和免疫评价和抗原递呈细胞作用机制研究,确定GⅡ.P16/GⅡ.2重组型诺如病毒候选疫苗的免疫效果和抗原递呈机制。首先通过扩增诺如病毒的VP1基因,克隆至p ET32a（+）载体,构建重组质粒p ET32a-VP1。将p ET32a-VP1转化至大肠埃希菌BL21（DE3）,加入IPTG进行诱导表达并优化诱导条件。利用His标签镍离子蛋白纯化柱纯化表达蛋白,SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度。将纯化后的蛋白与弗氏完全佐剂混合后对BALB/C小鼠进行腹腔注射免疫,制备多克隆抗体,并建立ELISA检测方法。通过SF9悬浮细胞大量制备诺如病毒病毒样颗粒,选用Q Focurose HPR纯化柱进行纯化,使用纯化后的病毒样颗粒进行多克隆抗体制备。最后,从小鼠体内分离树突状细胞以及巨噬细胞,并将病毒样颗粒与其共培养,观察相关细胞因子水平变化以探究病毒样颗粒在体内的作用机制。结果显示,成功扩增大小为1659 bp的诺如病毒VP1基因。PCR检测重组质粒p ET32a-VP1构建成功。将重组质粒转化至BL21（DE3）,IPTG诱导表达70×103的VP1重组蛋白,优化的最佳诱导表达条件为37℃,0.6 mmo L/L IPTG诱导5 h。重组蛋白以包涵体的形式表达,并SDS-PAGE鉴定镍柱纯化产物为单一电泳条带的目的蛋白。建立的ELISA方法结果显示,重组蛋白VP1的最佳包被浓度为2.5μg/m L,待检血清最佳稀释度为1:100,待检血清最佳孵育时间为1.5h,多克隆抗体效价为1:1638400。SF9悬浮细胞成功表达诺如病毒病毒样颗粒,SDS-PAGE鉴定阴离子层析柱产物为单一电泳目的条带。小鼠免疫实验多克隆抗体效价达到1:204800。诺如病毒VLP与DC或M?共同孵育实验结果显示诺如病毒VLP可以被DC细胞识别,但是无法有效活化DC细胞,诱导DC细胞成熟,诺如病毒VLP可以被M?细胞识别,且有效活化M?细胞。活化的M?细胞高表达其表面MHC-Ⅱ、CD40、CD80以及CD86,促进M?识别并吞噬VLP,并分泌表达IL-6、IL-12P70以及TNF-α等细胞因子促进M?细胞进行抗原递呈。巨噬细胞可以将诺如病毒抗原递呈给Na?ve CD4+T细胞,诱导Th0细胞向Th1类（细胞免疫）和Th2类（体液免疫）细胞分化,且当更偏向于Th1类细胞免疫应答。VLP可以诱导M?细胞由M2型向M1型极化。诺如病毒VLP通过NLRP3通路活化M?细胞进行T细胞抗原递呈。