目的:硬皮病(scleroderma)是以局限性或弥漫性皮肤及内脏器官结缔组织的纤维化或硬化,最后发生萎缩为特点的疾病。其病因及发病机制尚不清楚,目前多认为免疫机制、血管损伤、成纤维细胞激活等因素与发病有关。肥大细胞(mast cell,MC)是富含细胞质颗粒的组织定居细胞,由造血前体细胞衍化而来,在过敏反应中起关键性的作用,并且也参加其它疾病的病理生理过程,例如先天性与获得性免疫反应、组织损伤及纤维化等。体外的许多研究表明,肥大细胞能增加成纤维细胞的增殖及促进纤维形成的作用。MC具有储存事先合成的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα, TNF-α)的能力,而且在激活后能立即释放TNF-α。TNF-α属于一种前炎症因子,由多种细胞合成和分泌,参与免疫调节,介导炎症反应,同时促进多种细胞因子的产生,共同促进炎症的发展。有动物实验表明:TNF-α有刺激成纤维细胞增殖,增加基质蛋白的分泌和趋化的作用。近来有研究发现,肥大细胞也能分泌巨噬细胞游走抑制因子(macrophage migration inhibitory factor, MIF),MIF具有多种生物学活性,其中最重要作用是抑制巨噬细胞的移动,在炎症反应中,提高巨噬细胞对胞内异物的清除作用,且MIF具有促进成纤维细胞增殖,抑制其凋亡的功能。本文的研究目的旨在探讨MC细胞及其分泌的TNF-α、MIF与硬皮病的发病关系,进而为硬皮病的治疗提供新的理论依据。材料与方法:皮损标本来源于2003年5月～2007年9月就诊于河北医科大学第四医院皮肤科的患者,结合临床表现、病理确诊为硬皮病20例,其中男性12例,女性8例,年龄16～52岁,平均年龄28.12±5.84岁,病程2月～24月,平均6.23±5.12月。所有患者近1月来未经治疗,也无其它并发疾病。对照组标本来自外科外伤患者切除的正常皮肤20例,其中男性14例,女性6例,年龄18～50岁,平均30.13±6.12岁,未合并系统性疾病,在年龄、性别上与硬皮病患者无统计学差异。取患者皮损区组织做常规组织病理分析,常规组织病理采用苏木精-伊红(HE)方法,应用甲苯胺蓝特殊染色法计数MC,并计算MC脱颗粒率,MC计数与脱颗粒率采用两独立样本比较的t检验;皮损TNF-α、MIF的表达情况应用免疫组化SP法,结果采用两等级资料比较的Mann-Whitney U秩和检验以及Spearman等级相关分析。应用SPSS13.0统计软件分析实验结果。结果:1甲苯胺蓝染色结果MC胞浆颗粒染成紫红色,胞核呈蓝色。硬皮病组肥大细胞大小不一,形态多样,边缘模糊不清,脱颗粒现象明显。对照组肥大细胞呈圆形或卵圆形,细胞边界整齐光滑,胞质颗粒均匀,脱颗粒现象不明显。肥大细胞计数(X_±S):硬皮病组31.95±9.65(个/高倍),对照组20.00±3.83(个/高倍),两者差异有显著性(t=3.734,P<0.01)。硬皮病组脱颗粒率80.84±5.72(%),对照组脱颗粒率13.6±5.87(%),两者差异有显著性(t=36.810,P<0.01)。2免疫组化结果2.1 TNF-α阳性为胞浆及胞膜着色。表皮全层、真皮浅层血管广泛阳性着色,其中强阳性12例,阳性5例,弱阳性3例,阴性0例。正常对照组强阳性1例,阳性5例,弱阳性10例,阴性4例。硬皮病组与正常对照组比较,表达强度明显增高,差异有显著性(Z=-4.057, P<0.01)。2.2 MIF阳性细胞为胞浆及胞膜着色。在硬皮病皮损表皮全层呈强阳性表达,单一核细胞浸润的小汗腺腺体腺泡和导管周围以及皮肤小血管的内皮细胞呈现阳性表达,正常皮肤组织呈弱阳性表达,经统计学分析表明,两者有显著性差异(Z=-4.563,P<0.01)。结论:1硬皮病皮损区肥大细胞数量增多,脱颗粒活跃,提示肥大细胞参与了硬皮病的发病。推测其机制可能为肥大细胞直接影响成纤维细胞的增殖与分化和/或MC脱颗粒增多释放较多的炎性介质及细胞因子导致过度纤维化。2硬皮病患者组TNF-α水平显著高于对照组,提示TNF-α的过度表达破坏了机体胶原和基质的产生与降解的平衡。3硬皮病皮损中MIF水平明显高于对照组,推测硬皮病皮损区MIF过度表达,使炎症反应扩大,刺激纤维母细胞、胶原纤维过度增生,从而导致胶原纤维过度沉积而致病。4 MIF、TNF-α均可由肥大细胞产生,在硬皮病的发病过程中,MC、MIF、TNF-α起协同作用,致组织过度纤维化而致病。