携带抑制素基因pCIS质粒的大肠杆菌灭活苗对小鼠和黄牛免疫的影响研究

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本试验应用基因免疫、细菌载体、酶联免疫、B超等技术,研究抑制素基因免疫对小鼠和黄牛抗抑制素抗体的产生、繁殖性能、安全性的影响,通过灭活的大肠杆菌来传递抑制素基因疫苗,可能是一种提高抑制素基因免疫效果的方法,将为建立提高动物繁殖力的新技术奠定基础。主要试验内容如下:1、用含目的基因的大肠杆菌灭活苗免疫小鼠的试验研究本实验中,小鼠被分成四个大组,三个实验组和两个对照组。每一个试验组又分为三个不同的剂量。试验组分别注射:pCIS/普鲁卡因、pCIS/DDA和灭活菌;对照组注射:DcDNA3.1(-)和PBS。结果表明:首次免疫后,大肠杆菌处理组的抑制素抗体P/N值平均水平达到2,三个剂量之间没有显著差异(P>0.05);普鲁卡因和DDA处理组中50μg剂量组诱导的抗体P/N值比其它两个剂量都要显著(P<0.05);大肠杆菌处理的各组的P/N值比质粒最好剂量组的值要低,但差异不明显(P>0.05)。加强免疫后,各试验组的P/N值有所增高,但没有显著差异(P>0.05),与对照组比差异极显著(P<0.01),其它与初次免疫的结果相似。免疫后诱导的抗体阳性牛头数,大肠杆菌处理组三个剂量之间差别不大,但是质粒组的各剂量间差异很大。普鲁卡因组在第二次免疫后最高抗体阳性牛为90%,而最低为50%;DDA组在加强免疫后最小的抗体阳性率只有30%。产仔数方面,灭活大肠杆菌组的产仔数比对照组高,剂量间差异不大;与质粒组相比,差异也不显著;最多产仔数出现在普鲁卡因组的50μg剂量组。免疫后的母鼠体重和器官指数,结果显示没有异常情况出现。总的来说,含目的基因的大肠杆菌灭活苗免疫小鼠取得的效果与佐剂处理的差异不大,但是用大肠杆菌来传递抑制素基因疫苗,可以减少免疫时注射的有效剂量,同时免疫效果没有降低,因此,用大肠杆菌来传递抑制素基因疫苗是可行的,可以向大动物上推广。2、用含目的基因的大肠杆菌灭活苗免疫黄牛的试验研究本研究中采用PMSG、抑制素质粒疫苗和携带目的质粒的大肠杆菌灭活苗来免疫黄牛。裸质粒免疫时添加佐剂普鲁卡因和DDA,灭活苗组分三个剂量。结果表明:初次免疫后各个实验组的的P/N值都比较低,加强免疫后各个实验组的的P/N值明显增高,加强免疫后20天再检测抗体水平,各试验组的P/N值有所下降。用灭活菌免疫黄牛,三个不同剂量的P/N值在各次免疫中都没有显著差异(P>0.05);与两个质粒免疫组相比,它们之间差异也不显著(P>0.05)。用PMSG处理的10头牛中整个免疫期抑制素抗体的P/N值都较低。普鲁卡因和DDA处理组在初次免疫后抗体阳性牛均为2头,第二次免疫后抑制素抗体阳性牛达到3头;灭活菌组三个不同剂量所产生的抗体阳性牛头数也不相同,最大剂量在两次免疫中诱导的抑制素抗体阳性牛头数是最多的。发情时用B超对母牛卵巢检测结果表明,灭活菌组产生的成熟卵泡数与佐剂处理的两个质粒组之间差异很小,比PMSG处理组成熟卵泡数发育个数差异显著(P<0.05)。排卵方面,用PMSG处理的10头黄牛中有6头排双卵,比对照组多4头;灭活菌处理的最小剂量组黄牛中共有3头排多卵,剂量越大诱导排双卵的百分数越大。试验组阴性牛和阳性牛比较,灭活菌处理组中间剂量组的抗体阳性牛的的成熟卵泡发育个数与阴性牛的相比差异不明显,多0.92个,其它两个剂量组与抗体阴性牛的成熟卵泡发育个数都有显著差异(P<0.05)。以上分析表明用灭活菌免疫黄牛,虽然与PMSG处理组差异较大,但是和质粒组差异不显著,由于本实验所设计的三个剂量在诱导排双卵上最大剂量相对较好,因此我们还不能确定用灭活菌免疫黄牛的最佳剂量是多少,而且黄牛繁殖率的评判最终要取决于产犊情况,所以该研究还需进一步研究。
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