利用IL-8启动子报告基因分析平台筛选具有抑制肺癌微环境分泌IL-8能力的单体

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Vilmar
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目的:研究发现IL-8与肿瘤的血管新生有紧密的相关性,进一步影响到肿瘤病人的存活率。在肺癌组织细胞中,寻找具有抑制肺癌相关细胞分泌IL-8能力的天然产物单体。以期找到能够使IL-8表达量下降的中草药成分,影响癌细胞的生长和转移,进而找到一种免疫调节剂,调节肿瘤生长的微环境,缓解肿瘤的发展。方法:首先,将IL-8启动子构建的pGL-3basic质粒转染到HEK293细胞中,过4h用IC20浓度的的天然化合物单体处理24h。紧接着通过报告基因分析系统测其荧光值。然后用MTT方法进行不同的天然化合物单体在HEK293种细胞株中的细胞毒性初步了解。用筛选出的2’,4’-二羟基-4’,6’-二甲氧基查尔酮(简称查尔酮)分别处理CL1-0、CL1-5、THP-1三种细胞。研究分析该化合物对以上三类细胞各自表达IL-8的影响。采用实时定量PCR、ELISA、报告基因分析方法,来检测各细胞中IL-8的表达量同时利用EMSA分析其调控机制。结果:1.药物筛选结果在HEK293细胞中,经过筛选得到13种能够抑制IL-8产物的单体,其中主要包括芝麻素和2’,4’-二羟基-4’,6’-二甲氧基查尔酮两种主要天然产物单体。2. CL1-0细胞中IL-8启动子活性检测结果2’,4’-二羟基-4’,6’-二甲氧基查尔酮具有很好的抑制IL-8启动子的能力。其抑制效果达到50%。3. IL-8mRNA水平检测结果通过2’,4’-二羟基-4’,6’-二甲氧基查尔酮处理过的CL1-5细胞其IL-8mRNA水平明显提高。其增强表达的效果达到30%。4. IL-8上游调控机制分析结果经过2’,4’-二羟基-4’,6’-二甲氧基查尔酮处理的CL1-5细胞,发现作为IL-8转录因子的AP-1和NF-κB与IL-8上游启动子的结合位点的结合能力明显提高。5.细胞培养液中IL-8溶度检测结果肿瘤相关巨噬细胞THP-1经过2’,4’-二羟基-4’,6’-二甲氧基查尔酮处理,其分泌IL-8能力具有下降的现象。其抑制表达效果达到24.9%。结论:1.查尔酮对于初期的肺癌细胞和肿瘤相关的巨噬细胞具有正面作用——能够抑制CL1-0和肿瘤相关巨噬细胞THP-1分泌IL-8的能力。建议在肿瘤早期可以通过该化合物调节炎症因子IL-8的释放,从而调节肿瘤细胞生长的微环境,达到缓解肺癌生长的目的。2.查尔酮对于恶化程度较高的肺腺癌肿瘤细胞CL1-5具有负面作用——能够提高CL1-5细胞分泌IL-8的能力。即使与肿瘤相关巨噬细胞作用相反,肿瘤自身的自分泌和旁分泌作用不能小视,所以不建议在在晚期的肺癌肿瘤细胞中使用。
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