GFAP及hTERT双启动了靶向性表达hTIS基因引导放射性碘治疗胶质瘤

来源 :天津医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:biluo2007
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研究目的: 放射性碘治疗甲状腺癌是临床常用方法。非甲状腺来源肿瘤通过转染hNIS基因也能摄取碘,端粒酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)和神经胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)启动子都是肿瘤特异性启动子,对于靶向性治疗胶质瘤有潜在的研究价值。   方法: 先扩增GFAP、hTERT启动子等基因,并保存于相应质粒中。并测定各启动子的启动效率,然后构建了hTERT启动子引导腺病毒早起蛋白(early region1A,E1A)基因同时GFAP启动子引导钠碘转运体(human sodium iodidesymporter,hNIS)基因的条件复制腺病毒。胶质瘤细胞被腺病毒转染后,利用病毒空斑形成实验检测条件复制腺病毒的复制能力。进行Western blots实验,125I内流及外流实验并进行131I细胞克隆实验,来评估细胞摄碘情况。最后,在细胞实验的基础上,构建胶质瘤荷瘤裸鼠模型,进行动物体内放射性碘治疗实验。   结果: 成功扩增了相应基因并保存。实验证明GFAP启动子启动效率能达到SV40启动子的60%左右,hTERT启动子启动效率能达到SV40启动子的43%左右。成功构建了条件复制腺病毒Ad-Tp-E1A-Gp-NIS,并感染胶质瘤细胞。Westernblot实验显示43、70、49、120、70、110kDa的条带,分别对应着β-acting、GFAP、hTERT、hNIS和hTPO蛋白。病毒复制实验证明了Ad-Tp-E1A-Gp-NIS的有效性,hTERT启动子能成功的限制腺病毒在肿瘤细胞内的复制。摄125I实验证明GFAP启动子能成功引导hNIS基因表达并摄取碘。细胞克隆实验中显示感染Ad-Tp-E1A-Gp-NIS后肿瘤细胞能成功的被131I杀死。成功构建了U87荷瘤裸鼠模型了,感染Ad-Tp-E1A-Gp-NIS并进行放射性碘治疗后裸鼠生存周期延长,肿瘤生长被抑制,核素显像显示荷瘤裸鼠肿瘤部位能靶向性摄取放射性核素。   结论: 实验证明感染条件复制腺病毒Ad-Tp-E1A-Gp-NIS后,细胞实验及动物实验均证明,胶质瘤细胞系表现出肿瘤特异性的碘摄取,并引导针对胶质瘤的放射性碘治疗。
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