【摘 要】
：
目的:探讨在HepG2细胞胰岛素抵抗模型及糖尿病肥胖小鼠模型中,TRIB2对胰岛素抵抗的影响。方法:1、棕榈酸诱导HepG2细胞24小时,建立胰岛素抵抗细胞模型,检测胰岛素信号通路证实模型建立成功后观察TRIB2的转录及蛋白质水平变化;2、在胰岛素抵抗细胞模型中,利用质粒或siRNA分别过表达或降低细胞内TRIB2蛋白水平,检测细胞对培养基中葡萄糖消耗量,Western blots方法检测胰岛素信
论文部分内容阅读
目的:探讨在HepG2细胞胰岛素抵抗模型及糖尿病肥胖小鼠模型中,TRIB2对胰岛素抵抗的影响。方法:1、棕榈酸诱导HepG2细胞24小时,建立胰岛素抵抗细胞模型,检测胰岛素信号通路证实模型建立成功后观察TRIB2的转录及蛋白质水平变化;2、在胰岛素抵抗细胞模型中,利用质粒或siRNA分别过表达或降低细胞内TRIB2蛋白水平,检测细胞对培养基中葡萄糖消耗量,Western blots方法检测胰岛素信号通路重要蛋白表达量变化。3、8周C57BL/6J小鼠高脂饮食12周构建饮食诱导型糖尿病小鼠模型,在动物肝脏组织中检测TRIB2的转录及蛋白质水平变化。4、将腺相关病毒打入C57小鼠体内并饮食干预,建立TRIB2肝脏特异性的过表达或低表达糖尿病小鼠模型,检测体重、空腹血糖、空腹葡萄糖耐量和空腹胰岛素耐量及糖原PAS染色观察TRIB2对胰岛素抵抗水平的影响,和通过肝脏H＆E、油红染色及甘油三酯的检测观察对肝脏脂肪变性的影响。结果:1、在胰岛素抵抗HepG2细胞模型中,TRIB2在m RNA和蛋白水平表达量升高。2、过表达TRIB2后HepG2细胞葡萄糖消耗量减少,胰岛素信号通路受损加重。降低TRIB2水平,细胞葡萄糖消耗量增加,胰岛素信号通路损伤减轻。3、与对照组相比,肥胖小鼠模型肝脏组织中TRIB2的m RNA和蛋白水平升高。4、在肥胖小鼠模型中,肝脏特异性过表达TRIB2小鼠胰岛素抵抗、脂肪变性程度明显加重;肝脏特异性低表达TRIB2小鼠胰岛素抵抗及脂肪变性程度减轻。结论:在体内外胰岛素抵抗模型中,TRIB2的表达量上升;过表达TRIB2加重胰岛素抵抗,敲减TRIB2改善胰岛素抵抗,提示TRIB2参与胰岛素抵抗的发生发展过程。目的:此前我们在体内外胰岛素抵抗模型利用过表达/干扰技术验证TRIB2参与胰岛素抵抗过程。本部分进一步阐述TRIB2调控胰岛素抵抗的具体分子机制。方法:1、通过在线数据库预测筛选TRIB2可能直接结合的蛋白（AMPKβ1/2）。2、利用蛋白质免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation,Co-IP）内源性验证TRIB2和AMPKβ1/2亚基在细胞内的相互作用,细胞内转染Flag-TRIB2和HA-AMPKβ1外源性验证二者的相互作用,细胞免疫荧光技术（Immunofluorescence,IF）检测TRIB2和AMPKβ1/2的细胞内定位。3、Western blot检测TRIB2对AMPK各亚基及的表达。4、在过表达或干扰TRIB2的细胞中,分别使用AMPK的激活剂AICAR或抑制剂Compound C干预处理,检测培养基中葡萄糖消耗量及胰岛素信号通路的变化。结果:1、内外源性免疫共沉淀实验表明TRIB2可以与AMPKβ1结合,免疫荧光结果表明TRIB2和AMPKβ1/2在细胞内共定位。2、细胞内过表达TRIB2使AMPK的磷酸化水平及下游脂代谢基因ACC的磷酸化水平下降,抑制TRIB2使AMPK的磷酸化水平及下游基因ACC的磷酸化水平增加,细胞内TRIB2的含量变化对AMPKβ1/2含量无影响。3、与对照组相比,过表达TRIB2的细胞模型AICAR处理后,培养基葡萄糖消耗量增加,胰岛素信号通路损伤减轻.4、使用Compound C处理低表达TRIB2的细胞模型,与对照组相比,培养基葡萄糖消耗量减少,胰岛素信号通路损伤加重。结论:TRIB2可以通过结合AMPKβ1/2亚基影响复合物的磷酸化活性,影响细胞内胰岛素抵抗状态。
其他文献
微粒散射技术作为经典的探测手段之一,已经在气象学,海洋学,生物医学和环境学等多个领域有着广泛的应用。通过对微粒散射光的偏振态空间分布特性进行研究,可以得到微粒更加丰富的特性信息,是微粒散射理论与实用光散射技术的重要发展趋势之一。本文主要工作如下:对云层微水滴和水中微小油滴这两类散射场景进行建模和计算,讨论了各个输入参数对散射结果的影响,并基于传统的偏振态表征方法与前人对散射光偏振态表征的经验,总结
背景和目的肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是全球癌症导致死亡的主要原因之一,其在疾病早期阶段难以发现,进展到晚期时治疗选择有限且效果不理想,易转移,复发率高,预后很差。阐明肝癌发生和发展的机制,有助于发掘肝癌诊断/预后的生物标志物,开发有效的肝癌治疗药物。表观遗传调控功能障碍在肿瘤发生发展中起着重要作用。其中,BRD9介导的组蛋白乙酰化修饰是一种重要的表观遗传调
机械装备是船舶的主要组成部件,其平稳运行对于船舶运营安全性与可靠性等都具有重要的意义。然而,由于机械装备受到复杂工作环境、不当操作条件等因素的影响,其容易发生结构损伤、健康退化等问题,从而引发重大安全事故,造成巨大损失。为了保障船舶运营的安全性与可靠性,开展机械装备的寿命预测和故障诊断技术研究刻不容缓。随着人工智能技术,特别是深度学习的快速发展,探索将深度学习应用于机械装备寿命预测与故障诊断是一个
旨在研究花椒麻素对肥胖症模型SD大鼠体内脂质代谢功能的影响。将48只SD雄性大鼠按体质量分为空白对照组、高脂模型组、花椒麻素低/中/高剂量组[4、8、12 mg/（kg·d）]、非诺贝特阳性对照组[40 mg/（kg·d）]，经过灌胃6周，记录大鼠的初质量、末质量及采食量，计算实验动物饲料效率。解剖后分别测定SD大鼠血清中的总胆固醇（total cholestrol, TC）、甘油三酯（trigl
对图像中的文字进行提取和识别一直是计算机视觉中一个非常重要的课题,在图像理解、图像检索、自动驾驶等领域有广泛应用。随着深度学习在各个领域的广泛应用,基于深度学习的文字检测和识别算法拥有远超传统方法的性能和效率,逐渐成为该领域的主流。目前很多研究中文字检测和文字识别是作为两个独立的任务,但两者关系十分密切,相互联系并且相互促进,将检测和识别任务融合的端到端识别也逐渐成为一个重要研究方向。本文对不规则
由于设计知识缺乏和运行环境多变,水下结构物设计过程中存在大量不确定性。不确定性不断交叉传递与积累,导致水下结构物在运行过程中部分性能指标可能发生变化和偏移,甚至引起故障和失效,故在考虑不确定性因素的影响下进行水下结构物的稳健设计是很必要的。而常规的嵌套优化方法往往会消耗大量资源,近些年来基于代理模型的设计优化方法极大地提高了水下结构物的设计效率,但构建的代理模型预估的响应值和真实响应值之间存在误差
背景和目的肝细胞癌在全球范围内严重威胁了人类的健康,因此致力于肝癌发生发展的分子机制研究,以开发新的靶向药物是一项十分重要的课题。N6甲基腺苷修饰（N6-methyladenosine,m6A）作为机体内最丰富的RNA修饰,不仅广泛调节各种生理过程,也参与多种疾病的发生,特别是肿瘤。有研究发现,m6A调节蛋白中的“reader”阅读蛋白YTHDF1（YTH N6-methyladenosine R
肝细胞肝癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）是病死率最高的恶性肿瘤之一,经过数十年的发展,逐渐形成了以外科手术为主的综合治疗体系。然而近20年来肝癌的5年生存率并没有进一步的提高,究其原因是与肝癌切除后高复发率和转移率有关,因此探索肝细胞肝癌转移和复发的分子机制是目前肝癌基础研究的重要内容。RNA结合蛋白（RNA binding proteins,RBPs）能够与靶RNA
目的交感神经激活与慢性肾脏病（CKD）进展有关,慢性衰老细胞在老化和损伤的肾脏中积累,导致肾损伤后进行性纤维化。本研究主要探讨肾脏交感神经调控细胞衰老在肾脏纤维化中的作用及机制,为探索防治慢性肾脏病的新治疗靶点提供理论依据。方法首先我们建立了肾脏去神经动物模型,并在去神经成功2天后构建单侧输尿管梗阻（UUO）和单侧肾脏缺血再灌注损伤（UIRI）小鼠模型,以探讨肾交感神经与CKD以及与肾脏衰老的关系
随着光子学和激光技术的飞速发展,光场调控成为拓展激光应用的重要手段,也是当前光学领域的研究热点。矢量光场具有随空间位置变化的幅度、相位和偏振态分布,拥有独特的紧密聚焦场特性,在光学微加工、光学微操纵、等离激元定向传播、量子光学等领域得到广泛应用。本文从Richards-Wolf矢量衍射理论出发,结合偶极子天线辐射理论,研究了矢量光场的紧聚焦场特性及光学偏振拓扑结构。（1）基于Debye积分讨论了用