富含Fuc苹果果胶多糖提取与理化特性及活性研究

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果胶多糖是一类结构复杂以聚半乳糖醛酸为主的多糖聚合物,它是植物细胞壁的主要成分之一,在食品工业中已被广泛应用,可作为凝胶剂、悬浮剂、乳化剂、增稠剂等。近年来研究发现,果胶多糖具有增强植物抗逆性、提高动物的抗病能力等生物活性,在农业、畜牧养殖业、医药等领域中也具有广阔的开发应用前景。不同来源、提取条件获得的果胶多糖理化特性、结构、生物活性具有较大的差异。为克服传统酸提取法耗时、果胶多糖局部易降解等缺点,本实验以柠檬酸和超声相结合的复合法从苹果皮中提取苹果果胶多糖(Apple pectin, AP),将得到的AP与传统酸提取法所得AP从酯化度、糖醛酸含量、分子量、糖含量和单糖组成等方面进行了比较,并对得到的AP进行分离纯化、理化特性及免疫活性测定。取得的研究结果如下:1.本实验用柠檬酸与超声结法提取AP,发现苹果皮在pH2.5的柠檬酸萃取剂中450W超声下超声30min提取,AP得率最高(14.6%)。该方法提取到AP的酯化度:69.9%;糖醛酸含量:58.5%;分子量:大于400kDa;总糖含量:92.8%,均与传统酸提取法所得AP接近。气相色谱法分析表明,AP由Rha,Fuc,Ara,Xyl,Glc,Gal,GlcA, GalA八种单糖组成,单糖组成相对摩尔比为9.5:19.2:4.6:0.1:4.6:3.6:2.3:56.3。首次提取富含Fuc的AP(19.2%),目前己发现的AP中Fuc含量较低。2.采用气相色谱法对柠檬酸法,超声法,柠檬酸和超声结合法及传统的盐酸法提取AP进行单糖组成分析,发现其中性糖摩尔含量分别为:44.6%,37.8%,41.6%,23.9%;Rha与Ga1A的相对含量比分别为:1:5,1:16,1:7,1:70。将本实验采用的柠檬酸与超声结合法与传统盐酸法,超声法,柠檬酸法进行比较,数据表明用柠檬酸与超声结合法提取AP产率较高,省时,果胶多糖局部降解较少。3.用pH2.5的盐酸、亚硫酸、苹果酸、酒石酸和0.5%的草酸铵为萃取剂提取AP,并对其单糖组进行分析,均未发现含有Fuc的AP。可见富含Fuc的AP提取并不是由于pH(2.5)和果胶多糖溶液中ca2+的沉降引起的,而是因为柠檬酸萃取液能破坏果胶多糖HG与arabinnan结构,保留了果胶中的RG-Ⅰ和RG-Ⅱ结构。4.用DEAE色谱柱对柠檬酸与超声结合法提取的AP进一步分离纯化,得5个多糖组分:AP1、AP2、AP3、AP4和AP5。取得率较高的AP2、AP3及AP对小鼠灌胃给药,对小鼠吞噬细胞指数,免疫器官指数,溶血素水平进行分析。实验数据表明,AP、AP2和AP3均具有提高小鼠机体非特异性免疫能力,其中,在中剂量、小剂量浓度时,AP和AP3较AP2效果更明显;而在大剂量浓度组,AP组效果最差。
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