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目的 目前已公认血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growthfactor VEGF)，在实体肿瘤的生长和转移中起重要作用，而且与不良预后有关。但在恶性血液病中的作用还知之甚少，自1997年以来，不断有实验研究和临床观察资料表明在恶性血液病骨髓中血管生成明显增加，且存在VEGF高表达，提示其在恶性血液病中发挥重要作用。但目前在恶性血液病的发生尤其是疾病的进展中的作用机制的研究尚少。为探讨VEGF在成人急性髓系白血病(AML)的发生发展中的作用。我们分别从mRNA和蛋白水平动态研究了急性髓系白血病患者，尤其是难治性患者的骨髓细胞及血浆中的VEGF表达情况；用脂质体稳定转染VEGF165cDNA入HL-60细胞，观察其增殖、集落形成以及对三尖杉酯碱(HT，harringtonine)诱导的凋亡的变化情况。旨在进一步深入探讨VEGF在急性髓系白血病的发病机制及病情进展中的作用及其在临床监测微小残留白血病中的意义。 方法 采用逆转录PCR(RT-PCR)检测AML病人、正常人骨髓细胞和4种造血系统肿瘤细胞系细胞VEGF表达情况；用酶联免疫吸附(ELISA)方法检测患者骨髓细胞培养上清及血浆中VEGF蛋白的表达量；用脂质体法将VEGF165cDNA质粒及空载体PcDNA3.1-质粒转染入HL-60细胞，G418筛选转染克隆，挑取单克隆细胞进行传代、扩增及冻存，并用PCR、RT-PCR和ELISA法鉴定转染克隆(转染了空载体PcDNA3.1-质粒及VEGF165cDNA质粒的HL-60细胞分别命名为HL-60／V，HL-60／S)，用RT-PCR法检测HL-60／S细胞的VEGF及其受体的表达的变化情况；MTT实验、集落形成实验测定HL-60／V，HL-60／S细胞增殖情况；流式细胞仪测定细胞凋亡，研究三尖杉酯碱诱导下HL-60／V，HL-60／S细胞凋亡率的变化情况。 结果 在HL-60，K562，Raji细胞株中观察到VEGFm RNA表达,Jurkat细胞株中则未见表达。初诊未治或复发AML病人骨髓细胞VEGFmRNA表达阳性率为 83．87o，明显高于正常人（31．25o）及骨髓移植后的 AML病人（41．67％），但与化疗 CR 6个月的 AML（64．71％）比较无统计学差异（P＞0．05）。诊断为难治性 AML的 15例病人骨髓细胞 VEGFInRNA全部呈阳性，未诊断为难治性的16例阳性率68厂5％，两者具有显著性差异。 难治性和非难治性 AML病人血浆中 VEGF浓度分别为 639．69 pg／nil和415．44pg／ml，两者比较有统计学差异，且均显著高于正常人67．00pg／ml）和AML骨髓移植后病人门．31pg／nil人 P值均功．of。难治性 AML病人骨髓细胞培养上清的VEGF浓度（691二gpglinl高于非难治性病人（441．98P归）9 P值功力1，且两者分别比正常人高11和7，0倍。化疗后达＊R持续中位时间6个月的 AML患者的血浆中 VEGF浓度平均值为 206．38 pg／nil，与异基因骨髓移植后病人及初诊未治的AML患者血浆中VEGF浓度相比均有显著性差异。 （P＜0乃5和＊动刀1）。 我们成功用脂质体法将VEGF 165切NA质粒及空载体PCDNA3．1质粒转染入HL－60细胞，G418筛选转染克隆，获得单克隆细胞。PCR扩增出HL60／S细胞转染的VEGF 165cDNA；用RTPCR检测发现HL60／S的VEGFrnRNA表达量比HL．60／V明显增加；ELISA法检测HL．60／S细胞培养上清中VEGF蛋白量比HL．60／V细胞明显增高，证实转染成功，并使HL．60高表达VEGF 165。HL－60／S、HL．60／V集落培养集落数为 157刀0土17刀0和＊．00土12．90（n＝3），集落形成率分别是 31．40上 3．40o和 22．07士 2．60o。MTT 法证实转染VEGF165CDNA能促进HL－60细胞的增殖。流或细胞仪测定HL60／S、HL－60／V细胞的调亡率为3．18fo．33％和6．6lLO．50％，而且在HT诱导下HL60／S细胞的凋亡率明显低于HL－60／V。 结论VEGF在AML病人中存在异常高表达，在AML的发病机制中可能起一定的作用，难治性AML的VEGF的表达量比非难治性的和缓解期的AML明显增高，提示VGEF对AML疾病的恶化起促进作用，可作为判断AML病人预后指标之一，监测VEGF的变化，有助于了解患者的病情演变。转染VEGF16SCDNA造成HL－60细胞高表达VEGF后，促进了转染细胞自身的增殖及其集落的形成并抑制其凋亡，抵抗三尖杉酯碱诱导的细胞凋亡。