研究背景:腹腔化疗是一种区域选择性化疗方法。因其对腹腔内脏器的选择性且行之有效、操作简单,现已广泛用于结、直肠癌、肝癌、胃癌和卵巢癌的早期或术后治疗。传统抗癌药物在增加患者生存率的同时,其副作用也严重影响到患者的生存质量。因此,找到具有明显抗癌效果而又副作用小的腹腔化疗药物对腹腔化疗的临床应用意义重大。白藜芦醇是一种非黄酮多酚类化合物,也被称为芪三酚。1940年首次从白藜芦的根中提取出来。现在已发现白藜芦醇还存在于花生、葡萄、桑葚、藜芦、虎杖、决明子、何首乌、凤梨、谷类、朝槐等七十多种植物中。现已发现的白藜芦醇生物学活性主要包括抗病毒、神经保护、抗氧化、心血管的保护、抗炎、植物雌激素、抗肿瘤等作用。在抗肿瘤方面,现已经发现白藜芦醇对多种高发性肿瘤有抑制作用,包括淋巴系和髓系肿瘤、多发性骨髓瘤、乳腺癌、前列腺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、甲状腺癌、黑色素瘤、头颈部鳞状细胞癌、卵巢癌和宫颈癌。然而,许多实验结果显示白藜芦醇体内药物活性并不能达到体外水平,这表明白黎芦醇的生物利用度低,血药浓度及各组织器官的药物含量远远低于体外实验的有效浓度,因而在体内不足以发挥与体外实验相当的药理活性。文献提供的实验方法均为将白藜芦醇溶于一定比例的乙醇溶液后注射,然而实验室前期研究显示,白藜芦醇以10%乙醇为溶剂长期腹腔注射,药物会在腹腔内蓄积成不规则白色斑块,且对卵巢癌治疗效果不佳。这提示我们,在动物体内长期腹腔注射白藜芦醇,必须使用适当的溶剂,使其在腹腔内吸收迅速、完全,才能提高各组织内白藜芦醇的含量,达到治疗效果。目的:通过白藜芦醇持续腹腔给药分析:1)不同溶剂(10%乙醇和DMSO)对大鼠体内各器官药物分布的影响。2)10%乙醇为溶剂是否可一定程度上起到缓释的作用。3)通过HE染色方法,对比观察不同溶剂(10%乙醇和DMSO)给药组的组织形态学变化。通过上述实验,探究白藜芦醇腹腔注射合适的溶剂并推断其安全性。方法:从生物样品中分离、富集白藜芦醇,并建立有效的高效液相色谱分析方法检测其含量。C18色谱柱:5μm,4.6mm×250mm;Nacalai Tesque,Japan。流动相:A相20%乙腈(乙酸调PH为3.5的水配置),B相80%乙腈(乙酸调PH为3.5的水配置)。梯度洗脱:0min0%B—12min40%B—20min100%B—28min100%B。检测波长:303nm。流速:1ml/min。柱温:30℃。上样量:15μl。将12只大鼠随机分为3组:10%乙醇溶剂组1,DMSO溶剂组1,10%乙醇溶剂组2。大鼠称重后以20mg/kg的剂量腹腔注射白藜芦醇,每天一次,连续注射两周。DMSO溶剂组注射的白藜芦醇用DMSO溶解,10%乙醇溶剂组1和10%乙醇溶剂组2注射的白藜芦醇以10%乙醇为溶剂溶解,白藜芦醇浓度均为10mg/ml。最后一次给药后一小时,10%乙醇溶剂组1和DMSO溶剂组的大鼠脱颈处死,取心、肝、脾、肺、肾、肠,HPLC检测其中白藜芦醇浓度,HE染色观察其形态学变化。10%乙醇溶剂组2的大鼠最后一次给药后1h观察白色斑点形成情况并拍照记录。之后缝合腹腔,肌肉注射青霉素-链霉素0.2ml。最后一次给药后48小时再次打开腹腔拍照记录,并将心、肝、脾、肺、肾、肠,HPLC检测其中白藜芦醇浓度。结果:1)DMSO溶剂组中心、肝、脾、肺、肾、肠中白藜芦醇的浓度是10%乙醇溶剂组1的4.17、2.54、5.93、4.23、2.10、1.91倍。2)10%乙醇溶剂组2的四只大鼠,最后一次给药后1h,腹腔内可观察到不规则斑块,48h后消失。3)10%乙醇溶剂组1的组织和DMSO溶剂组的组织形态没有发生形态变化。结论:白藜芦醇以DMSO为溶剂,腹腔注射吸收完全。以10%乙醇为溶剂,白藜芦醇溶解度差,影响在腹腔的吸收。长期腹腔注射以10%乙醇为溶剂的白藜芦醇,药物可在腹腔蓄积,停药后缓慢释放,一定程度起到缓释的作用。长期腹腔注射以10%乙醇或DMSO为溶剂的白藜芦醇,对各脏器组织形态无影响,两种溶剂对各内脏均无损伤,初步推断DMSO更适宜作为实验动物注射用白藜芦醇溶剂。