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目的:蛋白尿是慢性肾脏疾病最常见的临床表现之一。足细胞损伤在蛋白尿发生和肾小球硬化的形成中起着重要作用。近年来研究发现,上皮-间充质转分化(epithelial mesenchymal transition,EMT)不仅发生在肾小管上皮细胞中,肾小球脏层上皮细胞即足细胞也会发生EMT。整合素连接激酶(integrin linkedkinase,ILK)是一种重要的细胞内信号分子,大量研究发现,ILK上调是足细胞损伤的共同反应。本研究拟观察CTGF对体外培养的足细胞ILK、nephrin和desmin表达以及细胞表面形态改变的影响,以进一步探讨CTGF介导足细胞损伤的机制。
方法:不同浓度rhCTGF(0、10、50ng/ml)干预足细胞24小时,观察rhCTGF对ILK、nephrin及desmin表达影响的浓度效应。以浓度为50ng/ml的rhCTGF干预足细胞0、24、48小时,观察rhCTGF对ILK、nephrin及desmin表达影响的时间效应。分别用real time RT-PCR方法和Western blot方法检测ILK、nephrin及desmin mRNA表达水平和蛋白表达水平。采用扫描电镜技术(scanningelectron microscopy, SEM)观察rhCTGF对足细胞表面形态改变的影响。
结果:在基础状态下,足细胞表达其上皮标志蛋白nephrin及少量间充质标志蛋白desmin,随着rhCTGF浓度增加,与对照组相比,desmin表达显著增加(P<0.05),而nephrin表达显著下降(P<0.05);rhCTGF刺激24小时,足细胞desmin表达上调(P<0.05),而nephrin表达下调(P<0.05),随着rhCTGF作用时间的延长,足细胞desmin表达进一步增加(P<0.05),而nephrin表达进一步减少(P<0.05)。在基础状态下,足细胞表达一定量的ILK,rhCTGF能上调足细胞ILK表达。扫描电镜显示,对照组足细胞胞体表面相对光滑,微绒毛较少;rhCTGF(50ng/ml)刺激24h后,足细胞表面形态发生改变,形成大量微绒毛。
结论:CTGF能引起足细胞nephrin表达下调,desmin表达上调,促进足细胞发生上皮-间充质转分化(EMT);CTGF能引起足细胞微绒毛化。同时,CTGF能诱导足细胞ILK表达增加,推测ILK表达上调可能是足细胞损伤机制之一。