斑马鱼心衰模型交感神经重构的实验研究

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【目的】  用ISO药浴斑马鱼,构建斑马鱼心气虚证慢性心衰模型,并探究该模型心衰标志物的表达和交感神经重构的情况。  【方法】  用盐酸异丙肾上腺素(Isoproterenol, ISO)持续多时间点药浴斑马鱼,构建斑马鱼心气虚证慢性心衰模型;使用相对定量qPCR法探究该心衰模型tnnt2a、Anp、Bnp、Cox2等心衰生化标志物的mRNA表达水平;运用斑马鱼整体免疫荧光染色技术检测酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase, TH),探究斑马鱼心脏的交感神经重构情况。  【结果】  1.ISO对斑马鱼心率的影响:处理组斑马鱼心率在48 hpf(hours post-fertiliaztion,受精后......小时)之后ISO处理组心率均明显下降,各时间点与对照组比有显著差异(P<0.01)。  2.斑马鱼tnnt2a的表达水平:与对照组相比较模型组tnnt2a在72 hpf及96 hpf两个时间点的表达水平升高,且有统计差异(P<0.05)。48 hpf及120 hpf两个时间点tnnt2a的表达水平没有统计学差异。  3.斑马鱼Anp的表达水平:与对照组相比较模型组Anp在48、72及96 hpf3个时间点的表达水平都升高,且有显著统计差异(P<0.01)。120 hpf时两组间的ANP表达水平无统计学意义。  4.斑马鱼Bnp的表达水平:与对照组相比较模型组Bnp在48、72、96、120 hpf4个时间点的表达水平都升高,且都有统计差异(P<0.05)。  5.斑马鱼Cox2的表达水平:与对照组相比较模型组BNP在72、96hpf2个时间点的表达水平升高,且有统计差异(P<0.05)。在48、120 hpf2个时间点,两组间的Cox2的表达水平无统计学差异。  6.交感神经分布:对照组斑马鱼交感神经分布较为集中,而处理组交感神经细胞分布散乱,阳性神经细胞表达量明显增多(P<0.05)  【结论】  1.模型构建方案:用浓度为0.020 mg/ml的ISO分别在24、48、72hpf3个时间点连续药浴斑马鱼,可构建斑马鱼心气虚证慢性心衰模型;  2. tnnt2a、Anp、Bnp、Cox2等生化标志物表达水平:斑马鱼心气虚证慢性心衰模型体内tnnt2a、Anp、Bnp、Cox2等生化标志物表达水平于72、96 hpf时均上调。  3.交感神经:处理组斑马鱼交感神经细胞与对照组相比,分布分散而且范围扩大,细胞数量增多。
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