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目的观察“短刺加电针法”对膝骨关节炎模型兔血清中CTX-II、PIICP含量与膝关节软骨中II型胶原(Collagen Type II)—盘状结构域受体(discoidin domain receptor,DDR)-2—基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-13信号通路的影响,探讨该治疗方法修复膝关节软骨细胞外基质的可能作用机制。方法将40只新西兰大白兔随机分为正常组(10只)和造模组(30只),造模组动物采用Hulth-Telhag法手术复制膝骨关节炎模型,Lequesne MG膝关节级别评估法对各组兔进行评价,X线评估造模结果。将造模成功的动物随机分为3组,即模型组、短刺组、普通针刺组,每组10只。短刺组采用短刺加电针法,普通针刺组采用常规针刺加电针法治疗,均选取“内膝眼”、“犊鼻”、“阴陵泉”、“足三里”和“梁丘”进行针刺。正常组和模型组正常抓取、固定,不予以干预。每次治疗20min,每日1次,5d为一疗程,每个疗程间隔2d,共治疗4个疗程。疗程结束后,Lequesne MG法再次评估各组兔膝关节级别,并对各组动物进行膝关节半月板及软骨取材。行HE染色,于光镜下观察软骨细胞的变化;行铅铀双重染色,于透射电镜下观察关节软骨超微结构和细胞器结构的变化。采用蛋白免疫印迹法检测软骨DDR2、II型胶原、MMP13的蛋白表达;免疫组化法检测软骨DDR2、II型胶原、MMP13的表达;逆转录聚合酶链式反应检测DDR2和MMP13的m RNA表达;酶联免疫吸附测定法检测血清PIICP、CTX-II含量。结果1.X线结果显示,造模组兔膝关节较正常组改变明显,造模组兔膝关节对线不良,内侧关节间隙狭窄,关节面粗糙变形,关节边缘有骨赘形成。2.光镜下观察HE染色结果显示,与正常组相比,模型组软骨细胞排列紊乱,细胞成簇出现,细胞核裂解退化明显;与模型组相比,短刺组和普通针刺组软骨细胞排列尚齐,成簇存在。透射电镜检查结果显示,与正常组相比,模型组软骨细胞核固缩,细胞外基质中胶原纤维排列不齐或降解;与模型组相比,短刺组和普通针刺组软骨细胞核形态较正常,基质中胶原纤维较丰富。3.Lequesne MG评分结果显示,造模后6周,模型组、短刺组和普通针刺组兔膝关节均出现强烈的局部疼痛反应,关节肿胀明显且活动度多在15-45度。与正常组相比,模型组、短刺组和普通针刺组Lequesne MG评分均显著增高(p<0.01);造模后10周,短刺组和普通针刺组兔膝关节局部疼痛刺激反应、膝关节肿胀程度均减轻,活动度可达45-90度。与造模后6周同组别兔Lequesne MG评分相比均明显降低(p<0.01)。4.Western-Blot、免疫组化、RT-PCR、ELISA结果显示,与正常组相比,模型组、短刺组和普通针刺组兔血清中PIICP含量与膝关节软骨中II型胶原的蛋白表达等均明显减少(均p<0.01),而血清中CTX-II含量与膝关节软骨中DDR2、MMP13的蛋白及m RNA表达均明显增加(均p<0.01);治疗后,短刺组和普通针刺组兔血清中PIICP含量与膝关节软骨中II型胶原的蛋白表达等较模型组明显增多(均p<0.01),而血清中CTX-II含量与膝关节软骨中DDR2、MMP13的蛋白及m RNA表达较模型组均明显减少(均p<0.01);与普通针刺组相比,短刺组兔血清中PIICP含量与膝关节软骨中II型胶原的蛋白表达增多(p<0.01),而血清中CTX-II含量与膝关节软骨中DDR2、MMP13的蛋白及m RNA表达减少(均p<0.01)。结论本次研究采用Hulth-Telhag法成功复制了膝骨关节炎兔模型。普通电针法和短刺加电针法均能调整软骨细胞排列方式,抑制细胞外基质的异常降解,恢复细胞外基质的合成,促进兔膝关节软骨修复;且短刺加电针法较普通电针法有一定的疗效优势。其作用机制可能与其阻断II型胶原/DDR2/MMP13通路的病理循环有关。