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目的将人脐静脉内皮细胞暴露于烹调油烟细颗粒物,建立烹调油烟细颗粒物损伤脐静脉内皮细胞模型,观察烹调油烟细颗粒物对人脐静脉内皮细胞血管形成的影响,并探讨烹调油烟细颗粒物影响HUVECs血管形成相关分子信号机制,为烹调油烟细颗粒物导致不良妊娠结局的安全评价和风险评估提供更有说服力的证据,为进一步治疗和防制烹调油烟细颗粒物引起不良妊娠结局提出策略与思路。方法1 PM2.5采样器采集烹调油烟中的PM2.5,确定PM2.5质量,调整烹调油烟PM2.5浓度为100mg/m L的储备液待用。2将100mg/m L烹调油烟PM2.5溶液稀释为不同浓度的染毒液(0,12.5,25,50,75,100,200μg/m L),分别处理细胞12 h,24 h,36h,MTT法检测烹调油烟细颗粒物对HUVECs存活率的影响。3将人脐静脉内皮细胞暴露于0μg/m L(溶剂对照组,按1‰DMSO)和100μg/m L烹调油烟PM2.5染毒组24h后,光镜下观察HUVECs形态的变化。4不同浓度烹调油烟PM2.5处理人脐静脉内皮细胞不同时间,Matrigel小管形成实验法检测烹调油烟PM2.5对HUVECs血管形成的影响,倒置显微镜下观察HUVECs成管情况。5不同浓度烹调油烟PM2.5处理人脐静脉内皮细胞24h后,ELISA方法检测HUVECs中VEGF和b FGF的水平。6不同浓度烹调油烟PM2.5处理人脐静脉内皮细胞24h后,RT-PCR方法检测HUVECs中VEGF/MEK1/2/ERK1/2/m TOR的m RNA表达。7不同浓度烹调油烟PM2.5处理人脐静脉内皮细胞24h后,Western blot方法检测HUVECs中VEGF/MEK1/2/ERK1/2/m TOR蛋白的表达。结果1 HUVECs的存活率与染毒浓度和时间存在剂量-反应和时间-反应关系;当细胞染毒浓度为50μg/m L,75μg/m L,100μg/m L,200μg/m L,染毒时间为24,36h时,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。当染毒浓度为50,75,100和200μg/m L,染毒时间为12h时,细胞存活率相对较高;当染毒浓度为50,75,100和200μg/m L,染毒时间为36h时,细胞存活率较低;当烹调油烟PM2.5浓度为100μg/m L,时间为24h时,细胞存活率与死亡率各占将近一半。根据MTT实验结果确定染毒浓度为0,25,50,75,100μg/m L,染毒时间为24h,进行后续实验操作。2光镜下观察形态的变化,与对照组相比,(低倍镜)暴露组HUVECs数量较少,且细胞形状看不出,镜下视野较模糊;(高倍镜)暴露组HUVECs数量较少,细胞间联系疏松且排列无序,边界模糊,细胞扭曲变形,胞体肿胀变形,细胞核固缩。3不同浓度的HUVECs成管情况,细胞浓度过多或过少,成管较差;当细胞浓度为1×105个时,细胞浓度适宜,且成管较好;不同浓度、不同时间烹调油烟PM2.5影响HUVECs血管的形成,与对照组相比,成管数量随着染毒浓度和时间的增加呈剂量-反应和时间-反应关系;当烹调油烟PM2.5浓度大于50μg/m L时,小管形成数量明显下降;当在6h时,细胞成管数量最多,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。此外,小管分解随着染毒浓度和染毒时间的增加呈现上升趋势;随着染毒时间增加到8h,细胞小管发生分解,染毒时间增加到11h时,小管几乎全部崩解,且染毒浓度越高,染毒时间越长,小管崩解的越完全。4不同剂量烹调油烟PM2.5暴露导致HUVECs VEGF和b FGF水平下降,与对照组相比,VEGF和b FGF含量随染毒浓度的增加呈下降的趋势,呈现剂量-反应关系,差异具有统计学意义(P<0.05)5不同浓度烹调油烟PM2.5暴露导致HUVECs VEGF,MEK1/2,ERK1/2和m TOR m RNA表达下降,与对照组相比,VEGF,MEK1/2,ERK1/2和m TOR m RNA表达水平随着染毒浓度的增多呈下降的趋势,呈剂量-反应关系,差异具有统计学意义(P<0.05)6烹调油烟PM2.5对HUVECs相关蛋白表达抑制作用。与对照组相比,p-VEGF/VEGF,p-MEK1/2/MEK1/2,p-ERK1/2 ERK1/2和p-m TOR/m TOR随着染毒浓度增加呈下降趋势,且存在剂量-反应关系,差异具有统计学意义(P<0.05)结论烹调油烟PM2.5暴露对HUVECs有细胞毒性和影响血管形成,VEGF/VEGFR2/MEK1/2/ERK1/2/m TOR信号通路参与了烹调油烟PM2.5抑制HUVECs血管形成的过程,脐带血管功能受损,对母-胎间氧气和物质运输产生影响,可能导致不良妊娠结局的发生。