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目的：克隆人端粒酶逆转录酶启动子片段,并证明hTERT启动子可以引导目的基因在肿瘤细胞中表达。方法：使用RT-PCR和荧光定量PCR检测多种肿瘤细胞及正常细胞中的hTERT表达活性；Western Blot检测hTERT在多种肿瘤细胞中的蛋白表达；通过PCR及pMD-18T质粒载体对hTERT核心启动子进行扩增和克隆；以pGL3-Basic为载体构建含hTERT启动子和hNIS基因的重组质粒,并通过荧光素酶活性实验检测hTERT启动子在不同细胞中的启动效率结果：1、RT-PCR的结果显示在H460、U251、U87、ARO及FRO等细胞中均存在hTERT mRNA的表达,只是活性的高低不一；而在正常细胞MRC-5中无表达。荧光定量PCR的结果显示在胶质瘤细胞U251内存在hTERT的高活性表达,与内参基因P-actin对照,其相对含量为0.18%。2、Western Blot结果显示在120 kD处可见阳性反应条带,为表达的hTERT目的蛋白。3、成功构建并鉴定了含3种不同长度hTERT启动子序列(260 bp、456 bp及1453bp)的pMD-18T和pGL3重组质粒,并成功构建并鉴定了含260bp hTERT启动子及hNIS基因的重组质粒pGL3-204-hNIS。4、荧光素酶活性实验结果显示,在上述肿瘤细胞中,3种hTERT启动子片段均可诱导荧光蛋白的表达,但其启动效率存在差异,其中pGL3-204中的启动子片段(260bp)在FRO、H460、U251和U87中启动效率最强,可以达到SV40启动子的80%。结论：在多种肿瘤细胞中均存在hTERT不同活性的表达,因此可以应用hTERT启动子引导治疗基因在多种肿瘤细胞中的特异性表达。而且hTERT核心启动子具有较高的启动效率,可以替代全长启动子引导hNIS基因表达。