人脐带间充质干细胞裂解液在体外对食管癌EC9706细胞增殖与迁移的抑制作用

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背景食管癌是我国及世界上常见的消化道恶性肿瘤之一,严重威胁着人类的健康,以手术为主的综合性治疗虽然获得了一定程度的疗效,但5年生存率仅8%-30%,10年生存率仅为5.2%-24.0%。这要求我们必须尽快研发新的治疗方法。间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)在多种疾病的治疗中展现了潜在的应用价值。MSCs对肿瘤细胞的作用仍有待进一步研究。阐明MSCs与食管癌之间的关系对于人们深入认识MSCs的特性,指导临床治疗意义重大。目的该实验主要探索人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUCMSCs)裂解液在体外对人食管癌EC9706细胞增殖、迁移的抑制作用,以期为食管癌的干细胞治疗提供实验依据,为临床综合治疗食管癌探索新的方法。方法1.用组织块培养法体外培养hUCMSCs,流式细胞仪检测细胞表型;收集脐带间充质干细胞并用反复冻融法制备脐带间充质干细胞裂解液;2.不同浓度hUCMSCs裂解液作用于食管癌EC9706细胞一定时间,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖状况。3.不同浓度hUCMSCs裂解液作用于食管癌EC9706细胞一定时间,倒置显微镜观察细胞形态。4. hUCMSCs裂解液作用于食管癌EC9706细胞一定时间后行流式细胞仪技术检测细胞周期、细胞凋亡。5.通过Tranwell迁移实验观察hUCMSCs裂解液对食管癌EC9706细胞迁移能力的影响。结果人脐带组织块培养7-12d后可见贴壁的成纤维样细胞,流式分析显示第5代细胞均表达CD2、CD90、CD166,不表达CD34、CD45和HLA-DR。MTT法显示加入hUCMSCs数等于或大于食管癌细胞数的裂解液时与明显抑制食管癌细胞的生长(P<0.05)对照组相比,且实验组各组抑制食管癌细胞增殖能力无明显差别(P>0.05)。实验组癌细胞数目较对照组明显减少,较多癌细胞细胞膜呈虫噬性改变,细胞可见空泡变形,视野内未见明显坏死漂浮癌细胞。与对照组相比,实验组食管癌细胞的G2/M期细胞数增高(P<0.05),凋亡细胞数增加(P<0.01)。Tranwell迁移实验显示与对照组比较,实验组EC9706细胞的迁移明显受到抑制(P<0.05)。结论hUCMSCs裂解液在体外对食管癌EC9706细胞的增殖和迁移均起到抑制作用;hUCMSCs裂解液通过调节细胞周期,将食管癌EC9706细胞暂时阻滞在细胞周期的G2/M期,同时诱导细胞调亡而抑制食管癌EC9706细胞的增长。
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