弥漫大B细胞淋巴瘤免疫学亚型、遗传学异常和microRNA表达研究及其临床意义

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目的:(1)探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-ell lymphoma, DLBCL)免疫学亚型与预后的关系;(2)了解DLBCL患者中BCL-6、MYC和p53基因的异常发生率,分析其与免疫学亚型及预后的关系;(3)探讨miR-155、miR-34a和miR-30a三种microRNA (miRNA)在DLBCL中的表达及意义。方法:收集常州市第一人民医院2009年-2011年诊断的DLBCL病例,全部病例根据2008WHO淋巴造血系统肿瘤分类标准复习切片,补充必要的免疫组化以核实诊断,最后确诊为DLBCL, NOS (not otherwise specified,非特指型)46例。采用免疫组织化学法(EnVision法)检测CD10、MUM1、BCL-6、BCL-2及Ki-67的表达情况,根据Hans分类方法分为生发中心B细胞型(germinal center B cell-like, GCB型)和非生发中心B细胞型(non-germinal center B cell-like, non-GCB型);间期荧光原位杂交技术(interphase fluorescence in situ hybridization,1-FISH)分析46例DLBCL患者BCL-6、MYC和p53基因的异常情况;从石蜡包埋组织中提取RNA,荧光定量逆转录PCR方法对3个miRNA (miR-155, miR-34a和miR-30a)进行定量检测,循环阈值(Ct值)比较法进行miRNA表达相对定量分析。结果:(1)肿瘤细胞CD10、BCL-6、MUM1及BCL-2的阳性率分别为21.7%(10/46)、60.9%(28/46)、63.0%(29/46)、54.3%(25/46),GCB型16例(34.8%),non-GCB型30例(65.2%)。其中BCL-6阳性表达较阴性者预后较好[总生存时间(overall survival,OS),P=0.010;无进展生存时间(progression-free survival, PFS), P=0.035],而BCL-2阳性表达较阴性者预后差(OS,P=0.024;PFS,P=0.046)。免疫学分型GCB型的预后优于non-GCB型(OS,P=0.032;PFS,P=0.013)。(2)46例患者中,BCL-6重排10例,BCL-6基因重排与BCL-6蛋白的表达两者之间无相关性(P=0.245)。BCL-6基因重排对DLBCL患者的OS(P=0.138)和PFS(P=0.095)无影响。MYC重排4例,全部见于GCB型。p53基因缺失组与p53基因正常组相比,生存时间差异有统计学意义(OS,P=0.046;PFS,P=0.043)。(3)与正常对照组相比,miR-155在DLBCL中显著高表达(P=0.011)。miR-155在non-GCB型的表达明显高于GCB型(P=0.000)。相比较MYC基因正常组,miR-155在MYC基因重排组的表达下调(P=0.024)。miR-34a在p53基因丢失组的表达较p53基因正常组显著降低(P=0.015)。相比较BCL-6蛋白阴性表达组,miR-30a在BCL-6蛋白阳性表达组明显低表达(P=0.010)结论:(1)DLBCL中,BCL-2蛋白表达与不良预后有关,而BCL-6蛋白阳性表达者预后相对较好。免疫学分型GCB型的预后优于non-GCB型。(2)BCL-6基因重排与BCL-6蛋白表达两者之间无相关性。MYC基因重排多见于GCB型。p53基因缺失的患者预后较差,p53基因可以作为判断DLBCL预后的参考指标。(3)miR-155在正常人群与DLBCL以及DLBCL的不同亚型之间表达不同,对DLBCL的诊断分型有一定参考价值。miR-34a对疾病预后判断有一定指导意义。miR-155、miR-34a和miR-30a可能是DLBCL潜在的治疗靶点。
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