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目的探讨候选lincRNA 1700020I14Rik在糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)小鼠肾脏组织及在高糖培养下的小鼠肾系膜细胞中的差异表达及其基本特征。方法通过高通量RNA sequencing(RNA-seq)技术,得到在糖尿病肾病小鼠肾脏组织中差异表达的长链非编码RNA(lnc RNA),并从中筛选出基因区间的长链非编码RNA(intergenic long non-coding RNA,lincRNA)。采用q RT-PCR技术验证差异lincRNA在糖尿病肾病小鼠肾脏组织及高糖条件下培养的肾系膜细胞中的差异表达。利用ORF Finder以及CAPT(the Coding Potential Assessment Tool)在线软件,分析1700020I14Rik基因的蛋白编码能力。运用原位荧光杂交(FISH)技术,观察候选基因1700020I14Rik在高糖培养下的系膜细胞中的表达,及其定位特征。结果通过RNA-seq技术,得到差异表达的lnc RNAs,经过筛选,确定含有42个lincRNAs,通过在DN小鼠及正常对照小鼠的肾脏组织的验证,得到7个lincRNAs在组织中与RNA-seq的结果表达一致,进一步将这7个lincRNAs在高、低糖培养的小鼠肾细胞细胞中进行验证,最终得到5个lincRNAs在系膜细胞中的表达与在肾脏组织以及RNA-seq的表达结果一致。通过分析该5个lincRNAs在肾脏组织中的表达丰度以及比对与人同源序列的保守度,从中挑选出保守性最好表达丰度较高的lincRNA 1700020I14Rik作为研究对象。通过在线软件分析,1700020I14Rik无蛋白编码的能力。经原位荧光杂交实验,确定1700020I14Rik在高糖培养的系膜细胞中显著性低表达,且在细胞质及细胞核内均有表达,但在细胞质中表达较多。结论lincRNA 1700020I14Rik是一种无蛋白编码能力的长链非编码RNA,在糖尿病肾病中,其表达下调,在肾系膜细胞中其均有表达,但主要定位于胞质。目的探讨1700020I14Rik对糖尿病肾病小鼠系膜细胞纤维化及增殖的影响。方法采用脂质体介导的转染方法,在肾系膜细胞中转染过表达质粒pc DNA3.1(+)-1700020I14Rik或干扰质粒高表达或沉默1700020I14Rik基因,q RT-PCR检测转染效率;EDU(Cell Counting Kit-8)、C CK-8(5-ethynyl-2-deoxyuridine labeling/detection kit)检测1700020I14Rik对系膜细胞增殖的影响;流式细胞术检测1700020I14Rik基因对系膜细胞的细胞周期的影响;通过q RT-PCR以及Western blot,检测1700020I14Rik对转化生长因子-β1(transforming growth factor,TGF-β1)、纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)及Ⅳ型胶原蛋白(type 4 coll agen,Col-4)的调控。结果质粒pc DNA3.1(+)-1700020I14Rik可在细胞中有效高表达1700020I14Rik,在三个干扰质粒中,si RNA-832能最有效的沉默1700020I14Rik的表达;过表达1700020I14Rik可显著性降低高糖培养下的系膜细胞的增殖以及阻滞细胞S期,相反,沉默1700020I14Rik后,可显著增加低糖培养的系膜细胞的增殖以及促进细胞S期发展。过表达1700020I14Rik基因可降低系膜细胞中TGF-β1、FN及Col-4的m RNA水平以及蛋白水平的表达,而沉默1700020I14Rik后,TGF-β1、FN及Col-4在m RNA水平和蛋白表达水平上显著提高。结论沉默1700020I14Rik的表达,可促进低糖培养的小鼠系膜细胞的增殖以及纤维化的发展,过表达1700020I14Rik基因后,高糖条件下培养的肾系膜细胞的纤维化及增殖受到抑制。目的探讨1700020I14Rik调节肾系膜细胞纤维化的潜在机制。方法运用USCS、mi Rbase和Bi Biserv2软件,探索与1700020I14Rik靶向结合的mi RNA,筛选出mi R-34a-5p;采用q RT-PCR检测高、低糖培养的系膜细胞中mi R-34a的表达,通过脂质体介导,转染其mimics、inhibitor至系膜细胞中,q RT-PCR检测转染效率以及相应的1700020I14Rik的表达;运用双荧光素酶报告系统验证mi R-34a-5p与1700020I14Rik的靶向结合关系;运用RNA免疫沉淀技术,探讨1700020I14Rik与RNA诱导的沉默复合体(RNA-induced silencing complex,RISC)之间的关系;EDU、CCK-8检测mi R-34a-5p对系膜细胞增殖的影响;流式细胞术检测其对系膜细胞的细胞周期的影响;通过Western blot,检测mi R-34a-5p对缺氧诱导因子1(Hypoxia Inducible Factor 1,HIF-1α)、TGF-β1、FN及Col-4的调控。于低糖培养的系膜细胞中共转染沉默调节蛋白1(Silent Information Regulator 1,Sirt1)inhibitor以及mi R-34a-5p inhibitor质粒,检测HIF-1α、TGF-β1、FN及Col-4的蛋白表达。通过在高糖培养的系膜细胞共转染1700020I14Rik过表达质粒与mi R-34a-5p mimic,检测Sirt1、HIF-1α、TGF-β1、FN及Col-4的蛋白表达;同样在低糖培养的系膜细胞共转染si RNA-832与mi R-34a-5p inhibitor,检测Sirt1、HIF-1α、TGF-β1、FN及Col-4的蛋白表达。结果通过生物信息预测软件,得到10个候选mi RNA,根据结合的位点数及相关文献报道,预测mi R-34a-5p与1700020I14Rik存在较好的靶向结合。在系膜细胞中通过脂质体介导的转染,可有效高表达或沉默mi R-34a-5p,而同时1700020I14Rik的表达相应的显著性下降或提高;经双荧光素酶验证后,mi R-34a-5p与1700020I14Rik存在直接靶向结合;RNA免疫沉淀技术发现1700020I14Rik可结合到由RNA诱导的沉默复合体上;过表达mi R-34a-5p可促进系膜细胞增殖,增加HIF-1α蛋白以及相关的纤维化蛋白TGF-β1、FN、Col-4的表达,而沉默mi R-34a-5p后,系膜细胞的增殖、HIF-1α蛋白以及相关的纤维化蛋白TGF-β1、FN、Col-4的表达水平收到抑制。在低糖培养的系膜细胞中共转染si RNA-Sirt1以及mi R-34a-5p inhibitor后,与只转染mi R-34a-5p inhibitor的细胞相比,HIF-1α蛋白以及相关的纤维化蛋白TGF-β1、FN、Col-4的表达显著提高。在高糖培养下的系膜细胞中,共转染1700020I14Rik过表达质粒与mi R-34a-5p mimic后,与只转染1700020I14Rik过表达质粒的细胞组相比,HIF-1α、TGF-β1、FN及Col-4的表达得到提高,Sirt1的表达显著抑制;在低糖中培养的系膜细胞中共转染si RNA-832与mi R-34a-5p inhibitor后,HIF-1α、TGF-β1、FN及Col-4的表达与只转染si RNA-1700020I14Rik质粒的细胞组相比显著抑制,而Sirt1的表达显著提高。结论1700020I14Rik与mi R-34a-5p存在直接靶向结合的关系,同时1700020I14Rik可结合到RNA诱导的沉默复合体上,从而参与对mi R-34a-5p的调节;mi R-34a-5p可促进小鼠肾系膜细胞的纤维化及细胞增殖的发展,与1700020I14Rik对系膜细胞的调控作用相反。mi R-34a-5p对肾系膜细胞的纤维化的作用可通过Sirt1/HIF-1α途径调节。1700020I14Rik对肾系膜细胞的纤维化调节受mi R-34a-5p的影响,其潜在的作用机制可能是通过mi R-34a-5p/Sirt1/HIF-1α信号途径参与调节。