羊无浆体(Anaplasma ovis)是一种由媒介蜱传播的专性红细胞内寄生的革兰氏阴性菌,主要引起绵羊和山羊的无浆体病。羊无浆体病临床症状主要表现为发热、贫血、黄疸和消瘦,严重时可导致死亡。羊无浆体病在全世界呈广泛流行,阻碍了养羊业的发展,给养羊业带来了严重的经济损失。目前,针对该病的检测技术主要有血涂片显微镜镜检和PCR,但是相对于基层单位,显微镜镜检专业性太强,PCR仪器较为昂贵,且由于基层的科研条件有限,所以在实际生产中推广应用较困难。本研究以羊无浆体为研究对象,通过质谱和生物信息学分析技术,鉴定出羊无浆体特异性的Anaplasma ovis Appendage-Associated Protein(AAAP),针对该蛋白,建立了检测羊无浆体特异性抗体的间接ELISA检测技术。应用本研究建立的方法,对采自我国23个省份54个不同地区的3138份血清进行羊无浆体病的血清学流行病学调查。1.利用免疫沉淀技术分析找出羊无浆体感染实验动物前后抗体变化的差异蛋白条带,通过质谱鉴定,与基因组数据比对,BLAST比对分析,筛选出相似度低于45%的特异性的羊无浆AAAP蛋白。2.利用原核表达载体对羊无浆体AAAP基因进行截短表达,纯化,经Western-blot分析表明重组蛋白与羊无浆体阳性血清具有较好的反应性,与绵羊肺炎支原体、山羊支原体山羊亚种、莫氏巴贝斯虫临潭株、巴贝斯虫未定种新疆株、尤氏泰勒虫、吕氏泰勒虫的阳性血清无交叉反应,表明该蛋白适合用作羊无浆体病的诊断抗原。3.以重组的羊无浆体AAAP蛋白为抗原,建立了用于羊无浆体病抗体检测的间接ELISA方法。通过对597份参考血清(434份阴性血清和163份阳性血清)检测,经MedCalc软件分析,当确定ELISA方法的阈值为6.00%时,其特异性为94.5%,敏感性为91.4%。4.应用本研究建立的间接ELISA方法对我国23省份54个不同地区的3138份血清进行检测,结果显示羊无浆体病在我国23个省份均有流行,不同省份羊无浆体的抗体阳性率有所差异,其中抗体阳性率最高的省份为云南省66.67%(66/99),抗体阳性率最低的为河南省9.41%(8/85),所有省份的平均抗体阳性率为35.25%(1106/3138)。该调查研究结果查清我国羊无浆体病的真实流行情况奠定了基础。