由于成纤维细胞具有有限的分裂次数，在50PDs左右进入衰老阶段，80PDs左右进入危机阶段，细胞凋亡。所以成纤维细胞这种“短暂”的寿命，是无法满足转基因核移植的要求的，限制了在科研和实际当中的应用。作为转基因核移植的供体细胞，至少要能存活到45PDs以上，这样才能保证外源基因在细胞内的整合和正常表达，以及其它为核移植的所作的前期准备工作的顺利完成。本试验将携带有增强型绿色荧光蛋白(enhanced green nuorescent protein，EGFP)报告基因和人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcfiptase，hTERT)目的基因的质粒PEGFPC1-hTERT通过脂质体转染法转入牛耳成纤维细胞，并考察其寿命以及对核移植的影响，为生产转基因动物做准备。 1、用含10％血清DMEM培养液培养牛耳成纤维细胞，通过脂质体Lipofactamine 2000将外源端粒酶逆转录酶基因hTERT转入牛耳成纤维细胞，用荧光显微镜观测EGFP的表达，用600 ug/mL G418筛选获得阳性克隆，然后换为含300 ug/mL G418的培养液继续培养使阳性克隆得到扩增。 2、获得的阳性克隆提取RNA，设计特异性引物进行RT-PCR反应，经电泳分析在443bp处出现目的条带，未转染的细胞无目的条带。转染后的12代(TN12)和22代(TN22)细胞端粒酶活性检测均呈阳性，未转染的细胞无端粒酶活性。 3、测定阳性细胞12代(TN12)和22代(TN22)以及阴性细胞12代(N12)和22代(N22)的生长曲线与群体倍增次数进行比较。群体倍增指数分别为4.14±0.13，3.27±0.09，3.14±0.06，2.06±0.05，TN22与N12差异不显著(p>0.05)，TN12和N22与各组均差异显著(p<0.05)。结果显示阳性细胞生长速度明显高于未转染的阴性细胞，寿命延长，但只越过了衰老期(50PDs左右)，没有越过危机期(80PDs左右)，不能永生化。经流式细胞仪检测，阳性细胞凋亡率明显降低，核型正常。 4、用55PDs阳性细胞(TN14)与21PDs的阴性细胞(N7)长满瓶皿后分别做供体细胞进行核移植，比较卵裂率，囊胚率和囊胚细胞数。结果两者的卵裂率，囊胚率差异均不显著(p>0.05)，但是阳性细胞的囊胚细胞数有所减少与阴性细胞差异显著(p<0.05)。