平肺口服液含药血清对人肺腺癌A549细胞增殖的影响

来源 :北京中医药大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:liongliong438
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本论文包括文献综述和实验研究两个部分。文献综述回顾了肺癌的中医药治疗进展,主要从病因病机、辨证分型、中医治法研究、中西医结合辨证论治、中医药治疗肺癌的机制研究五个方面进行论述。文献回顾表明中西医结合治疗肺癌注重辨证施治,标本兼顾,扶正与祛邪相结合,在改善临床症状、减轻放化疗毒副反应、为放化疗增敏、提高生活质量、延长生存时间等方面取得了良好的临床疗效。但中医药治疗肿瘤的部分机制不明,在机理方面一直缺乏突破性研究,相关信号通路与药物靶标不明,使中医药走向国际受到了一定阻碍。国外在通过体外实验研究中医药抗肿瘤机理方面,多采用血清药理学方法,其相关的研究方法和实验结果可以为中医药抗肿瘤研究提供借鉴。本实验研究采取血清药理学方法,观察了平肺口服液含药血清对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用。目的:临床研究发现以养阴清肺为治法的平肺口服液是延长肺癌患者生存期的独立预后因素之一,但缺乏深入研究。本实验是建立在以往相关研究的基础上,主要运用血清药理学方法,初步探讨了平肺口服液含药血清对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用。为之后从细胞周期、凋亡等角度证明平肺口服液治疗肺癌的作用机理,是否影响PPAR-γ/β-catenin信号传导通路奠定基础,揭示中药与化疗药物治疗肿瘤的疗效差异和可能机理。方法:平肺浸膏20g/kg/d和生理盐水2ml/只/d分别灌服大鼠,连续4d,第5天早晨末次灌服后2h腹主动脉无菌取血制备含药血清。复苏后的人肺腺癌A549细胞,加入含10%胎牛血清的DMEM,置于37℃、5%CO2的培养箱中无菌培养,每3-4天以0.15%胰酶溶液消化传代,使细胞呈单层贴壁生长,实验时取对数生长期细胞制成单细胞悬液备用。实验分常规对照组,3个不同浓度正常血清组和3个不同浓度含药血清组。将A549细胞以每孔1×103/200μl接种于96孔培养板,分别于培养0h、24h、48h、72h、96h,CCK-8试剂盒检测细胞存活率。数据录入Excel软件进行保存,使用SPSS 17.0软件进行分析,多个样本均数的比较采用t检验。结果:在常规培养体系中添加5%-25%正常大鼠血清,对A549细胞生长存在明显影响,表现为生长抑制作用;但这种生长抑制作用与添加大鼠血清的浓度关系不大。在常规培养体系中添加20%含药大鼠血清培养至48h时即对A549细胞增殖存在影响,表现为生长抑制作用,与同浓度血清对照组的细胞存活率相比存在统计学差异(P<0.05);这种抑制作用随时间增长而增强,培养至72h、96h与对照组相比存在明显差异(P<0.01)。结论:平肺口服液有可能从抑制人肺腺癌A549细胞增殖方面起到抗肿瘤的作用,下一步研究可从细胞周期变化、细胞凋亡情况,PPAR-γ信号通路等深入观察平肺口服液的作用机理。
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