本研究分为三部分： 第一部分 慢性胰腺炎大鼠模型的建立 目的：建立油酸诱导的慢性胰腺炎大鼠模型，证实模型成功，为进一步对胰岛β细胞 K<,ATP>通道的功能改变和药物影响作用、以及防治胰源性糖尿病的研究奠定基础。 方法：选取健康Wistar大鼠，随机分为造模组和对照组。造模组行胰胆管插管后，用油酸经插管向胰腺内逆行灌注的方法制作慢性胰腺炎大鼠模型，对照大鼠经插管灌注等量的生理盐水。观察大鼠术后6周的胰腺形态、病理改变，以及口服糖耐量、空腹血糖(fasting blood glucose，FBG)和血胰岛素的变化。 结果：造模组大鼠术后6周表现糖耐量异常，FBG明显升高(p<0.05)，血胰岛素含量明显降低(p<0.05)。胰腺病理显示：胰腺导管和腺泡结构明显破坏，部分区域明显坏死，血管扩张充血；炎细胞浸润明显，以淋巴细胞为主，炎细胞周围可见空晕；胰岛结构破坏，α、β细胞不同程度的减少。部分组织可见纤维组织增生。 结论：油酸诱导的慢性胰腺炎大鼠模型表现为外分泌腺体广泛退化，内分泌腺体损伤，并出现糖耐量异常、空腹血糖和血清胰岛素含量异常，模型制作成功，可用于进一步作慢性胰腺炎与胰岛β细胞K<,ATP>通道相关性的研究。 第二部分 慢性胰腺炎胰岛β细胞KATP通道的表达及药物的干预作用 目的：观察慢性胰腺炎大鼠胰岛β细胞K<,ATP>通道表达的改变，探讨西药那格列奈和中药丹参素对胰岛β细胞K<,ATP>通道表达的干预作用，及药物对CP大鼠糖耐量、空腹血糖、胰导素水平等异常改变的治疗作用和作用机制。 方法：选取健康Wistar大鼠，参照第一部分方法建立慢性胰腺炎大鼠模型和对照，成模后将大鼠分为模型组、那格列奈组、丹参素组和对照组，每组10只，那格列奈组大鼠每日每只予那格列奈溶液(37.5mg/kg 体重)灌胃，丹参素组大鼠每日每只予丹参素溶液(0.224mg/kg 体重)灌胃，模型组与对照组大鼠均每日以蒸馏水(0.5ml/100g 体重)灌胃，共4周。4周后测定口服糖耐量(OGTT)、空腹血糖(FBG)和血胰岛素的变化，处死动物留取胰腺组织及血标本，观察各组大鼠胰腺形态、病理改变，激光共聚焦显微镜观察免疫荧光染色的胰岛β细胞K<,ATP>通道亚基 Kir6.2和SUR1 的表达改变，Westem blot法检测Kir6.2和SURl蛋白表达改变，RT—(巢式)—PCR法检测 Kir6.2和SUR1的mRNA表达改变，以及两种药物的干预作用。 结果：模型组大鼠与对照组相比，表现为糖耐量异常，FBG 明显升高(p<0.05)，血胰岛素含量明显降低(p<0.05)；那格列奈和丹参素可以有效的改善这些异常(p<0.05)，那格列奈治疗效果更为明显。胰腺病理显示：模型组胰腺导管和腺泡结构明显破坏，部分区域明显坏死，血管扩张充血：炎细胞浸润明显，以淋巴细胞为主，炎细胞周围可见空晕；胰岛结构破坏，α、β细胞不同程度的减少。部分组织可见纤维组织增生。那格列奈治疗组可见破坏的胰岛结构部分修复，α、β细胞数量比模型组增多，丹参素治疗组则可见到炎细胞浸润数量明显减少，胰腺纤维化表现减轻。Westem blot 显示模型组 Kir6.2和 SUR1 蛋白表达显著低于对照组(p<0.05)，那格列奈对于二者的表达表现了一定的上调作用，丹参素对于β细胞K<,ATP>通道的表达几乎没有影响，这与免疫荧光观察到的结果基本一致。RT—(巢式)—PCR检测Kir6.2和SUR1 mRNA结果显示，模型组二者mRNA表达明显低于对照组(p<0.05)，那格列奈对二者mRNA表达较模型组有上调作用，但仍显著低于对照组，丹参素对两种亚基mRNA表达的改善几乎没有作用。 结论：油酸诱导的慢性胰腺炎大鼠表现出糖耐量异常、空腹血糖和血清胰岛素含量异常，外分泌腺体广泛退化，内分泌腺体损伤，慢性炎症浸润及组织纤维化，胰岛β细胞K<,ATP>通道蛋白及mRNA表达降低，那格列奈和丹参素能从不同程度、不同角度对这些异常有所改善。中西医结合治疗将具有较好的疗效和应用前景。 第三部分 大鼠胰岛细胞的分离、纯化和原代培养的方法研究 目的：研究正常Wistar大鼠胰岛细胞分离、纯化和原代培养的最优方法和条件，提供胞膜完整、活性佳的胰岛细胞，为进一步探讨慢性胰腺炎大鼠胰岛细胞电生理改变及药物的干预作用提供必要的前提和基础。 方法：水合氯醛腹腔麻醉，采用胶原酶v逆行灌注、原位消化及Ficoll-400梯度离心的方法分离、纯化大鼠胰岛，并分离、培养胰岛单细胞。 结果： 1.采用胶原酶逆行灌注、Ficoll-400梯度离心法分离、纯化胰岛，每只大鼠可得到 321±60 个胰岛。 2．急性分离、培养的胰岛细胞 12h-24h 贴壁，4-5d胰岛细胞生长状态最佳，胞膜完整，折光性好。 结论：经胰胆管逆行灌注胶原酶v、原位消化及 Ficoll-400 梯度离心的方法为一种有效的分离、纯化胰岛细胞的方法，经分散为单细胞并原代培养的胰岛细胞4-5 天达到最佳状态，胞膜光滑、完整，细胞折光性好，适合进一步电生理研究的需要。