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目前,人们主要通过使用化学肥料和化学农药来提高农作物的产量,然而其存在很多不利的影响,如效果不持久、土壤环境污染等。通过施用微生物肥料和生防制剂来替代化肥、农药,可以改善化肥和化学农药带来的危害,实现农业的可持续发展。内生细菌是生活于健康植物的各种组织和器官中,而不引起宿主植物任何疾病的一类微生物。内生细菌具有促进植物生长的作用,利用其促生作用来开发微生物菌肥和生防制剂,在农业方面具有重大的研究意义。本研究以药用植物木豆为材料,采用梯度稀释涂板法对木豆内生细菌进行分离,并结合形态观察和16S rRNA序列分析方法对其鉴定;采用Salkowski 比色法,钼锑抗比色法,CAS检测法等方法对木豆内生细菌分泌植物生长素(IAA),磷酸盐增溶,产铁载体等体外促生活性进行研究;利用平板抑制试验对菌株抗病活性进行研究并利用PCR和Voges-Proskauer法进一步验证菌株的抗菌和促生机制;通过盆栽试验,验证促生菌株对小麦幼苗的促生作用。研究结果如下:1.以木豆根、茎、叶为材料,将不同梯度的组织稀释涂布于NA、LB和TSA 3种培养基上进行分离培养,传代和纯化,最终获得纯化菌株54株。其中从NA培养基中获得20株,从LB培养基中获得18株,从TSA培养基中获得16株;从根中分离的菌株占63%,从叶中分离的菌株占29%,从茎中分离的菌株占16%。2.参照《细菌鉴定手册》和分子生物学方法鉴定,根据木豆内生细菌不同形态及16S rRNA序列,将分离得到的54株内生细菌进行分类,主要为:假单胞菌属(Pseudomonas sp.)、肠杆菌属(Enterobacter sp.)和芽孢杆菌属(Bacillus sp.)。3.通过比色法和平板检测法对分离获得的54株内生细菌进行体外促生活性研究,有39株可以分泌吲哚乙酸(IAA),分泌的IAA浓度范围为0.86-80.8μg/mL,其中8株菌株分泌IAA的浓度达到10μg/mL以上;36株可以溶磷,溶磷量范围为2.8-25.8μg/mL;42株可以产嗜铁素,R值在1.2-8.8之间;24株可以产淀粉酶,R值在1.1-1.6之间;17株可以产蛋白酶,R值在1.2-1.5之间;28株可以产纤维素酶,R值在1.1-6.1之间。4.对B.subtilis BE-R4拮抗植物病原菌活性进行了研究,其对尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum和腐皮镰孢Fusarium solani有较好的抑制作用,抑菌率分别为52.5%和50%。通过PCR检测发现,该菌株含有编码聚酮类及非核糖体肽类抗生素生物合成的基因PKS-I和NRPS。通过Voges-Proskauer法,确定B.subtilis BE-R4含有促进植物生长的物质3-羟基-2-丁酮。5.通过对菌株体外促生活性的筛选和测定,B.subtilis BE-R4表现出较强的促生活性和抑菌活性。选取B.subtilis BE-R4为试验菌株进行盆栽试验,经B.subtilis BE-R4处理后可显著提高小麦幼苗生物量。小麦的平均根长和叶长分别增加了 52.1%和44.4%;叶和根的鲜重增加比例分别为71.2%和60.2%;根和叶的干重增加比例分别为75.8%和59.3%。