CiFD早花材料的创制及其参与低温诱导柑橘开花的研究

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柑橘作为我国南方地区主要栽培的果树之一,在农村经济发展和乡村振兴过程中有着重要作用。柑橘产业发展主要是新老品种交替,但因柑橘童期较长,导致新品种选育速度缓慢,难以满足柑橘产业发展需求。因此,研究柑橘童期调控机制,缩短柑橘育种周期对柑橘产业发展具有重要意义。FD基因在模式植物的成花过程中充当关键的角色,柑橘中CiFD基因会发生选择性剪接产生不同的转录本(CiFDα和CiFDβ),本研究主要对CiFD不同转录本的功能进行了功能分析并创制了CiFDα和CiFDβ柑橘转化材料。通过低温处理等试验研究,初步解析了CiFD参与低温诱导柑橘开花的调控途径。主要研究结果如下:1.为了研究CiFD不同转录本在柑橘开花过程中的功能,首先将CiFD的DNA序列(CiFD-DNA)及转录本CiFDα和CiFDβ的序列转入烟草,结果表明,转基因烟草的开花时间明显早于对照,开花时叶片数也明显少于对照。此外,CiFDα和CiFDβ转基因烟草中,开花相关基因Nt FT、Nt LFY、Nt AP1表达量明显高于对照,这些结果说明CiFD-DNA、CiFDα、CiFDβ可能在柑橘成花过程中充当重要角色。2.为了进一步证实CiFDα和CiFDβ的功能,以枳为研究材料,进行CiFDα和CiFDβ的超表达遗传转化。通过DNA和RNA鉴定,共获得9个CiFD-DNA转基因株系、14个CiFDα转基因株系和10个CiFDβ转基因株系。值得注意的是,一些转基因株系开花极早,在试管内呈现了花蕾。定量结果表明,转基因系中开花相关基因(Ci FT、Ci AP1和Ci LFY)的表达水平显著高于对照,随后将转基因株系移植到土壤中,到目前为止尚未观察到开花。这些结果说明CiFD是开花的正调节剂,CiFDα和CiFDβ可能共同参与柑橘的开花调控。3.通过GUS染色和酶活分析实验,证实了CiFD启动子活性受低温诱导。同时,对成年甜橙进行低温处理实验,检测CiFDα和CiFDβ的表达趋势,发现CiFDα可受低温诱导,表达趋势明显上调,而CiFDβ表达趋势则无明显变化。说明CiFDα可能在低温诱导柑橘开花过程中充当重要角色。为了进一步解析CiFD调控柑橘开花的途径,随后通过酵母单杂实验,进行CiFDα和CiFDβ分别与下游靶基因Ci LFY进行互作验证,结果显示CiFDβ可以与Ci LFY启动子互作,然而,CiFDα并不能与Ci LFY启动子互作。这些研究表明,在低温条件下,CiFDα通过驱动下游靶基因Ci LFY来参与了柑橘的开花过程。
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