成骨相关转录因子Osterix启动子调控机制初步研究

来源 :暨南大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:baogehaohao
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目的 在Osterix基因5’端上游区域搜寻BMP-2诱导Osterix转录上调的转录因子潜在核心作用区域,作为后续深入研究的基础。 方法 用Real-Time Q-PCR的方法检测出在转录水平上BMP-2能诱导Osterix的表达上调,然后用PCR的方法,从BAC-RP23-118K10克隆中,扩增出一系列不同长度的Osterix启动子片断,将上述片断克隆到Luciferase报告载体pGL3-Basic Vector中,构建出一系列Osterix启动子缺失突变的报告载体。将构建好的载体和内参pRL-TK共转染至C2C12、C3H10T1/2、和MC3T3三种细胞中,BMP-2诱导48小时后用Dual-Luciferase Reporter Assay System检测不同样品中Luciferase的表达量。通过其表达量的变化,分析其启动子上的调控区域。 结果 BMP-2在转录水平存在对Osterix的调控作用,成功的构建了一系列Osterix启动子缺失突变的报告载体,通过检测,找到了对Osterix基础表达活性有上调作用的三个潜在控制区,即-100~+81、-760~-560和-1254~-1042及两个潜在的BMP-2调控Osterix表达下调的控制区-100~+81和-760~-560。 结论 初步确定了Osterix核心启动子区域,并建立了一个对Osterix转录水平调控的研究平台。
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