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目的:利用p53基因突变的大肠癌细胞,探讨人野生型p53(wt-p53)基因增强5-FU对大肠癌细胞化疗敏感性的分子生物学机制,为进一步研究肿瘤基因治疗提供理论依据。方法:一、将携带wt-p53基因的质粒分别转染两种p53基因突变的人大肠癌细胞HT-29及SW620,以含绿色荧光蛋白GFP的质粒作为对照,Western blot分析细胞中p53及细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白的表达水平。二、通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Cyclin D1 mRNA在转染了wt-p53基因的细胞中的表达情况。三、将化疗药物5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)以不同浓度或不同时间分别作用于HT-29及SW620细胞,另外将已转染wt-p53基因的大肠癌细胞用5-FU进行诱导,Western blot分析上述干预条件下细胞中p53及Cyclin D1蛋白表达水平的变化。四、流式细胞术(FCM)检测wt-p53基因联合5-FU组及各对照组中细胞凋亡的改变情况。结果:一、Western blot显示转染wt-p53基因的HT-29及SW620细胞中Cyclin D1蛋白的表达水平明显升高,与wt-p53基因呈剂量依赖性关系。二、RT-PCR证实Cyclin D1蛋白上调不影响其mRNA在细胞内的转录水平。三、细胞中Cyclin D1蛋白的表达水平在5-FU作用下出现明显下降,并与5-FU呈时间和剂量依赖性关系,这种5-FU所致的Cyclin D1蛋白表达水平的降低在细胞预先转染了wt-p53基因时会被抑制。四、流式细胞术检测结果显示,wt-p53基因联合5-FU组较其他对照实验组其大肠癌细胞凋亡率显著升高。结论:转染人wt-p53基因可以提高细胞内Cyclin D1蛋白的表达水平,并抑制由5-FU所致的Cyclin D1蛋白的降解,从而提高大肠癌细胞对化疗药物5-FU的敏感性。