斑马鱼胚胎fgfrs与下游通路基因时序性表达及关系

来源 :温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yiluyouyu
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[目的]:  1.为了解正常情况斑马鱼胚胎发育过程中fgfrs基因fgfrla、fgfr1b、fgfr2、fgfr3、fgfr4)的时序性表达规律以及fgfrs基因之间的关系。  2.为了解正常情况斑马鱼胚胎发育过程中fgfrs下游信号通路基因akt1、mapk1、plcγ1的时序性表达规律以及它们之间的关系。  3.为了解正常情况斑马鱼胚胎发育过程中fgfrs基因与其下游信号通路基因之间的关系。  [方法]:  从斑马鱼胚胎受精后开始计时,选取正常发育胚胎至EM液中于光照培养箱中恒温培养,光周期为明14h:暗10h,采用Trizol法提取正常发育至4、6、10、12、18、24、48和72hpf斑马鱼胚胎总RNA,检测合格后经过逆转录反应转变成cDNA,采用荧光定量PCR方法检测上述各时间点胚胎fgfrs fgfr1a、fgfr1b,fgfr2、fgfr3、fgfr)及下游信号通路基因akt1、mapk、plcy1 mRNA的相对表达量,并分析基因fgfrs表达量之间、下游信号通路基因之间以及fgfrs与下游信号通路基因之间的关系。  [结果]:  1.斑马鱼胚胎发育过程fgfrs mRNA动态表达有明显的峰谷现象(P<0.01),胚胎fgfrs开始表达阶段依次为fgfr1a与fgfr1b(囊胚期)、fgfr4(原肠胚初期)、fgfr2(原肠胚期)及fgfr3(原肠胚后期),其表达高峰期分别在原肠胚期、原肠胚后期、体节期及胚胎发育中后期。  2.斑马鱼胚胎发育过程基fgfr1a与fgfr1b动态表达趋势相似(r=0.830,P<0.05)。fgfr1a与fgfr3、fgfr1b与fgfr4、fgfr2与fgfr3 mRNA表达量之间相关分析也有意义(r值分别为-0.726,0.821及0.772,P<0.05)。  3.斑马鱼胚胎发育过程基因akt1、mapk1及plcγ1mRNA动态表达也有明显的峰谷现象(P<0.01),其中基因mapk1与plcy1表达高峰期都在囊胚期,囊胚期后表达量锐减,而基因akt1体节期之前表达水平较低,高峰期出现在胚胎发育中后期。  4.斑马鱼胚胎发育过程基因mapk1与plcy1动态表达趋势相似(r=0.883,P<0.01)。  5.斑马鱼胚胎发育过程基fgfrs与akt1、mapk1、plcγ mRNA表达量之间以负性关系为主,其中基因plcγ1与 fgfr2,akt1与 fgfr1a、fgfr1b、fgfr3 mRNA表达量之间相关分析也有意义(r值分别为-0.728,-0.795,-0.724及0.848,P<0.05)。  [结论]:  1.斑马鱼胚胎发育过程fgfrs时序性表达有一定规律性,fgfr1、fgfr4、mapk1、plcγ1主要参与胚胎早期发育调控,fgfr2、fgfr3、akt1主要参与胚胎中、后期发育调控。  2.基因fgfr1a与fgfr1b共表达使其调控作用具有冗余能力,基因fgfr1与fgfr3之间在表达上可能存在相互制约关系,mapk1与plcγ1能相互作用,fgfrs下游通路基因表达对fgfrs可能存在负反馈调节作用,fgfr1与fgfr4,fgfrfgfr3,akt1与fgfr3之间实质性关系尚有待于进一步研究。
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