目的:分离纯化雪灵芝(Arenaria kansuensis)多糖,并对纯化组分进行分子量测定、单糖组分分析及免疫活性初探;探察雪灵芝粗多糖对S180荷瘤小鼠免疫激活作用,为进一步分离、筛选雪灵芝多糖抗肿瘤相关活性组分提供依据。方法:1)采用水提醇沉法提取雪灵芝粗多糖(AKCP),DEAE-52纤维素柱及葡聚糖凝胶G-75(Sephadex G-75)柱进行分离纯化。苯酚-硫酸法测定纯化各阶段多糖总糖含量。凝胶渗透色谱-十八角度激光光散射(GPC-MALS)法和高效液相(HPLC)法检测纯化组分的分子量及单糖组成。MTT法检测各阶段多糖对体外培养脾淋巴细胞增殖的影响,NO释放实验和IFN-γELISA检测AKP-2a各浓度组小鼠腹腔巨噬细胞培养上清中二者的水平。2)将昆明小鼠随机分为6组:正常组、模型组、香菇多糖组、AKCP高、中、低剂量组,除正常组外建立S180荷瘤小鼠模型,其中正常组和模型组给予蒸馏水0.5 mL/d灌胃,香菇多糖组给予0.25 mg/kg香菇多糖0.1mL/d腹腔注射,AKCP高、中、低剂量组小鼠分别给予200、100、50 mg/kg AKCP 0.5mL/d灌胃,连续给药8 d后,无菌条件下眼球取血,剥离瘤组织,称重计算抑瘤率、体重增率、胸腺指数、脾脏指数,检测脾淋巴细胞增殖活性、NK细胞杀伤活性和CD3~+/CD4~+/CD8~+亚群,脾淋巴细胞中IL-2、TNF-α、IFN-γmRNA的表达量和三者在血清中的表达水平。结果:1)AKCP通过分离纯化,获得总糖含量较高的AKP-2a多糖组分,初步确定其分子量范围及10种主要单糖组成;AKCP、AKP-2及AKP-2a各浓度组小鼠脾淋巴细胞增殖水平,均明显高于对照组(P<0.05),AKP-2a各浓度组小鼠腹腔巨噬细胞培养上清中二者的水平,较对照组呈浓度依赖性增高(P<0.01)。2)AKCP高剂量组和香菇多糖组有明显的抑瘤作用(P<0.05);AKCP高剂量组和香菇多糖组脾淋巴细胞增殖、NK细胞杀伤活性高于模型组(P<0.05);与模型组比较,AKCP高、中、低剂量组CD3~+CD8~+亚群显著升高(P<0.05);AKCP高剂量组和香菇多糖组脾淋巴细胞中IFN-γmRNA的表达量高于正常组(P<0.05);AKCP低剂量组和香菇多糖组血清中IFN-γ、IL-2水平高于模型组(P<0.05);与正常组比较,AKCP高、中、低剂量组血清中TNF-α均明显升高(P<0.05)。结论:1)通过分离纯化,获得了总糖含量较高的雪灵芝多糖AKP-2a组分,初步确定其分子量范围及单糖组成,证实其具有激活淋巴细胞增殖、促进巨噬细胞功能的生物活性;2)雪灵芝多糖对S180荷瘤小鼠免疫功能具有明显的激活作用。