论文部分内容阅读
近年来,我国南方沿海城市人工养殖石斑鱼的品种逐渐增多,然而,随着放养密度的增加,气候的恶化及生态环境的破坏等问题的出现,导致了养殖过程中各种病害的发生,使用抗生素类药物所引起的药物残留和耐药性等不良后果已经引起了社会各界的广泛关注。有许多报道指出在水产养殖中科学地使用益生菌可以在一定程度上替代抗生素,还能促进鱼类生长、提高免疫力、调控肠道菌群平衡等。所以,益生菌的筛选及应用研究对水产养殖业的健康发展尤为重要。本研究以健康石斑鱼幼鱼肠道中的细菌为候选菌,筛选出具有益生效果的菌株,并将这些益生菌株制备成复合益生菌剂,应用于石斑鱼饲喂试验,研究其对石斑鱼生长、免疫功能和胃肠道菌群组成的影响。对采集的石斑鱼样本进行肠道微生物的分离,共获得48株菌。其中3株芽孢杆菌B18(Bacillus aerius)、B20(B.aryabhattai)和B25(B.licheniformis)具有产蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活性,对供试的5株水产致病菌具有拮抗能力,且菌株无溶血性,对鱼体无毒性,确定为潜在益生菌。生长特性的单因素研究结果表明,三株菌的最适生长条件为pH 6-8、盐度0.5%-2.5%、温度30℃-40℃,且能形成生物膜。对三株菌耐受模拟消化道能力进行研究,结果表明在人工胃液(pH=4)和人工肠液中2 h的存活率均达到75%以上。将3株芽孢杆菌制成复合芽孢杆菌菌剂,添加至石斑鱼饲料中进行饲喂试验,饲料含菌量为1×10~7CFU/g,研究其对石斑鱼生长性能及免疫指标的影响,28 d后发现复合芽孢杆菌饲喂后,试验组鱼的体增重、特定生长率均显著高于对照组(P<0.05);此外,试验组鱼血清中ACP、AKP、SOD、LZM的酶活性显著高于对照组(P<0.05),补体C3活性与对照组间产生了极显著差异(P<0.01),试验组鱼脾中免疫基因Ig M、MHCIa、MHCIIa和CD8a表达水平显著高于对照组,上调倍数分别为4.63、17.37、3.74和4.29。研究复合芽孢杆菌菌剂对石斑鱼肠道菌群变化的影响,结果表明试验组鱼肠道中门水平厚壁菌门(Firmicutes)的相对丰度显著升高(P<0.05),属水平罗姆布茨菌属(Romboutsia)和鞘脂单胞菌属(Sphingomonas)的相对丰度也显著高于对照组(P<0.05),与对照组相比,在芽孢杆菌纲中芽孢杆菌属的比例明显增多。本研究获得3株具有益生菌潜力的芽孢杆菌,明确了三株菌的最适生长条件及其对模拟消化道的耐受力,饲料中添加三株菌能促进石斑鱼的生长,显著提高鱼血清和鱼脾中免疫指标的活性。此外,还能增加鱼肠道有益菌的丰度,改善鱼的健康状况。