非洲马铃薯和‘凤丹’组织培养与药用成分测定

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非洲马铃薯(Hypoxis hemerocallidea Fisch.,C.A.Mey.&Avé-Lall.)与‘凤丹’(Paeonia ostii T.Hong et J.X.Zhang var.lishizhenii B.A.Shen)分别是非洲和我国重要传统药用植物。其传统繁殖方式为种子繁殖,繁殖后代难免变异;由于繁殖材料与季节影响,无性繁殖系数低,难以产业化。组织培养不受限制快速繁殖,且保持植株优良性状,成为优良种质繁殖和生物工程育种的重要手段。本研究分别建立非洲马铃薯微型快速繁育技术体系;探讨‘凤丹’抑制褐化发生的生理生化机理;分析比较两种植物组织培养材料的7种药用成分含量,为组织培养产业化发展提供理论依据和技术支持。主要结果如下:1.非洲马铃薯组织培养体系建立非洲马铃薯种子外植体的不定芽最佳增殖培养基为MS培养基+6-苄基腺嘌呤1.0 mg/L+吲哚-3-乙酸0.05 mg/L+蔗糖30 g/L,不定芽黑暗处理4 d,继代培养30d,增殖系数高达2.52;以基本培养基类型(MS、1/2MS、WPM培养基)、3-吲哚丁酸浓度(0.5、0.8、1.0 mg/L)、蔗糖浓度(15、20、30 g/L)组成的正交试验探究非洲马铃薯生根条件,结果表明,生根最佳培养基为MS培养基+3-吲哚丁酸1.0 mg/L、蔗糖20 g/L,生根率高达80%,生根数为3.23条;以草炭、珍珠岩、草炭与珍珠岩1:1混合的3种基质移栽不定芽生根的小植株,草炭移栽成活率最高,达79.87%。2.‘凤丹’试管苗褐化抑制效应研究抗坏血酸(50、75、100和125 mg/L)、Na2S2O3(0.5、1.0、1.5、2.0 m M/L)、Ag NO3(20、40、60、80 mg/L)处理‘凤丹’试管苗,60 mg/L Ag NO3的褐化率低达23.33%,增殖系数为2.28,生长量高达0.33 g,无死亡现象发生;吸附剂聚乙烯吡咯烷酮(0.5、1.0、1.5和2.0 g·L-1)、活性炭(0.5、1.0、1.5和2.0 g·L-1)处理,0.5 g/L聚乙烯吡咯烷酮处理无褐化,增殖系数为1.82,生长量可达0.30 g,死亡率为2.22%;黑暗预处理(1、3、5、7 d)、4℃低温预处理(1、3、5 d)结果表明,4℃低温预处理3 d,褐化率最低,为26.17%。暗处理3 d的增殖系数高达2.30,生长量高达0.39 g,无死亡现象;皮尔逊相关性分析显示,褐化率与多酚氧化酶(PPO)呈现极显著正相关(P<0.01);过氧化物酶(POD)显著负相关(P<0.05);超氧化物歧化酶(SOD)无显著相关性,表明PPO和POD与‘凤丹’试管苗褐化密切相关。3.非洲马铃薯和‘凤丹’组织培养物药用成分测定非洲马铃薯试管苗检测到原儿茶酸、对羟基苯甲酸、绿原酸、间羟基苯甲酸、阿魏酸和水杨酸等6种药用成分中,以绿原酸和间羟基苯甲酸为主要成分,绿原酸含量最高达264.30μg/g,显著高于其他药用成分(P<0.05);‘凤丹’试管苗检测到没食子酸、原儿茶酸、对羟基苯甲酸、绿原酸、间羟基苯甲酸、阿魏酸和水杨酸7种药用成分中,没食子酸,对羟基苯甲酸和阿魏酸为主要成分,阿魏酸含量高达411.82μg/g,显著高于其他种类的药用成分(P<0.05)。
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