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目的:本实验拟采用体外培养卵巢癌细胞系SKOV3(卵巢浆液性囊腺癌细胞株)和人脐带间充质干细胞(UC-MSCs),以UC-MSCs作为基因治疗的靶向运载工具,构建UC-MSCs负载IL-12重组腺病毒载体,并在体外产生具有生物学活性的mIL-12。观察UC-MSCs负载IL-12重组腺病毒(AdIL-12-MSC)对卵巢癌SKOV3细胞生长形态、体外增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响,探讨UC-MSCs作为基因治疗的靶向运载工具对卵巢癌的疗效以及其机制,以期为卵巢癌的基因治疗提供新的靶向。方法:1体外培养卵巢癌细胞系SKOV3(卵巢浆液性囊腺癌细胞株)、人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)及人胚胎肾上皮293细胞,并逐日以倒置显微镜观察细胞形态变化及增殖情况。2将重组腺病毒反复扩增至所需量,应用腺病毒介导IL-12基因转染UC-MSCs(AdIL-12-MSCs)作为转染组,同时设立空病毒载体转染UC-MSCs细胞组(Ad-MSCs组)和UC-MSCs组。3利用Western Blotting技术检测AdIL-12-MSCs组、Ad-MSCs组和UC-MSCs组中IL-12蛋白的表达。4利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测AdIL-12-MSCs组、Ad-MSCs组和UC-MSCs组中IL-12mRNA的表达。5将卵巢癌SKOV3细胞接种于转染24h后的AdIL-12-MSCs上清液作为转染组,将卵巢癌SKOV3细胞接种于培养24 h后的UC-MSCs上清液作为对照组。6倒置显微镜对比观察转染组及对照组卵巢癌SKOV3细胞第24~72h的生长形态,以明确AdIL-12-MSCs对卵巢癌SKOV3细胞生长形态的影响。7利用MTT检测AdIL-12-MSCs对卵巢癌SKOV3细胞体外增殖影响。8利用流式细胞仪检测AdIL-12-MSCs对卵巢癌SKOV3细胞细胞周期和细胞凋亡的影响。9采用SPSS 13. 0统计软件,t检验检测组间差异的显著性,数据以“均数±标准差”(x±s)表示,P<0.05为差异有显著性的标准。结果:1 Western Blotting检测转染后AdIL-12-MSCs中IL-12蛋白的表达示:AdIL-12-MSCs组细胞有清晰条带出现,而在对照的Ad-MSCs组和UC-MSCs组细胞中均未检测到IL-12蛋白的表达,表明AdIL-12-MSC内IL-12基因在蛋白水平获成功表达。2 RT-PCR结果表明:AdIL-12-MSCs在389bp处有阳性条带出现,符合IL-12扩增片段长度,表明AdIL-12-MSCs内IL-12基因在mRNA水平获成功表达,而在对照的Ad-MSCs组和UC-MSCs组细胞中未检测到IL-12 mRNA的表达。3倒置显微镜下观察SKOV3细胞培养24~72h后生长情况可见:在不同时段,转染组SKOV3细胞生长均受到抑制,细胞贴壁率下降,细胞密度降低,细胞突起减少;对照组SKOV3细胞形态不同时段均未见明显变化。4 MTT法检测转染组和对照组SKOV3细胞24～72h体外增殖情况如下:随着时间延长,转染组对SKOV3细胞抑制增殖能力显著提高,72 h后抑制率达(47.56±2.31)%,具有统计学意义(P<0.05)。5流式细胞仪检测AdIL-12-MSCs对SKOV3细胞周期影响结果显示:转染组与对照组相比,SKOV3细胞处于增殖期S+G2期的细胞比例下降,停滞于G0/G1期的细胞比例增加,提示AdIL-12-MSCs能够抑制SKOV3细胞增殖。6流式细胞仪检测AdIL-12-MSCs对SKOV3细胞凋亡结果显示:转染组SKOV3细胞凋亡率(9.72±1.38)%,与对照组SKOV3细胞凋亡率(2.69±0.45)%相比,凋亡率显著增高,具有统计学意义(P<0.05)。结论:本实验以UC-MSCs作为基因治疗的靶向运载工具,成功构建UC-MSCs负载IL-12重组腺病毒载体—AdIL- 12-MSCs细胞系,并观察到其分泌的外源性IL-12能够显著抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖并诱导其凋亡。该细胞系可应用于基因治疗肿瘤方面的研究,为卵巢上皮性癌的基因治疗及细胞免疫治疗提供了新的靶向。