罗氏沼虾诺达病毒(MrNV)及其卫星病毒(XSV)的生物学特性

来源 :中国科学院研究生院(武汉病毒研究所) | 被引量 : 5次 | 上传用户:wq123sd
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罗氏沼虾诺达病毒(MrNV)和极小病毒(XSV)是近年从患白尾病的罗氏沼虾幼苗体内分离到的两种病毒。虽然已经确定MrNV和XSV(或其中之一)是引起罗氏沼虾白尾病的病原,但是在疾病发生过程中,MrNV和XSV各自的作用并不清楚,同时XSV直径仅为15 nm而被怀疑是一种新的卫星病毒。本论文通过构建随机cDNA文库和cDNA末端快速扩增方法,得到XSV中国株基因组RNA长度为872 nt,将XSV中国株与法国株进行序列比较,发现中国株在5’末端和3’末端分别多了26和50个核甘酸,序列分析表明中国株的两端序列能形成与植物卫星病毒相似的二级结构,而法国株则不能。这为XSV分类地位的确定提供了重要参数。建立了基于TaqMan探针的检测MrNV和XSV的实时荧光定量RT-PCR方法,为疾病的预防和早期诊断提供了快速、灵敏的手段。该方法检测灵敏度可达到50个拷贝/反应,并且有很好的重复性;将该方法应用于病虾样品检测,并与双重RT-PCR方法进行了比较,前者灵敏度比后者高至少1000倍。结合感染实验和病毒定量检测方法,研究了MrNV和XSV的感染特性以及两者之间的关系。从患白尾病的罗氏沼虾幼苗体内分离纯化了MrNV和XSV,并用含不同浓度的MrNV和XSV病毒混合液浸泡感染健康幼虾,结果发现高浓度MrNV低浓度XSV的病毒悬液感染组出现了较高比率的白尾症状,而低浓度MrNV高浓度XSV的病毒悬液感染组则只有极少数幼虾出现白尾症状;对感染后虾体内的MrNV和XSV进行了定量检测,结果显示高浓度MrNV感染的幼苗体内的MrNV基因组拷贝数显著高于低浓度MrNV感染的幼苗体内的MrNV基因组拷贝数。这些结果表明MrNV是引起白尾病的主要病原。同时统计学分析表明XSV和MrNV拷贝数之间呈显著相关,从而证明XSV是依赖于MrNV复制的卫星病毒。此外,通过5’-RACE测定了MrNV亚基因组RNA3的序列,从而确定了RNA3在RNA1上的位置;利用哺乳动物RNAi研究技术,初步研究了RNA3编码的B2蛋白的功能,证实MrNV B2蛋白在Hela细胞中具有抑制宿主RNAi的功能。为研究B2蛋白在MrNV与宿主之间的相互作用奠定了基础,对水生甲壳类动物的RNAi功能及其抗病毒机制研究具有重要意义。
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