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研究背景与目的随着全球酒精类商品消费的快速增长,和酒精相关的死亡率也日益增长。过量饮酒引起的酒精中毒已经成为独立的致死因素,酗酒、酒驾和急性酒精中毒对社会的危害毋庸置疑。在法医鉴定中,酒精在死亡案例中的作用、法律上的责任划分问题一直是争论的热点。在临床病例中,酒精的过量摄入对患者的消化、呼吸、循环和神经系统都会造成严重的损伤。因此,酒精对机体损害机制的研究不仅为临床上相关疾病的治疗提供方向,也能为法医学鉴定提供理论基础。海马是大脑边缘系统的主要结构之一,主要负责短期记忆的储存和空间定位。酒精作用使海马神经细胞结构和功能发生变化,正常的生理功能受到影响,引发记忆、行为和长期学习障碍。本研究采用蛋白质免疫印迹（Western blot,WB）和免疫荧光（Immunofluorescence,IF）技术,观察酒精对体外培养的原代大鼠海马神经元细胞形态的改变,并研究酒精对脑源性神经营养因子（brain-derived neuotrophyic factor,BDNF）、Sortilin和神经营养素受体p75(P75NTR)表达的影响,为明晰酒精损伤的分子机制提供理论基础,也为酒精相关疾病的治疗提供方向。研究方法实验对象选择出生24小时内的SD大鼠乳鼠,在无菌环境下对颅脑进行解剖,分离海马组织,通过木瓜蛋白酶消化和高温抛光玻璃管吹打的方式制备细胞悬液,然后收集细胞进行体外培养。在海马神经元生长至第7天时,选取状态较好,纯度较高的细胞随机分为对照组、1.5 g/L乙醇浓度组和3.0 g/L乙醇浓度组。在实验组培养基中加入一定量的无水乙醇,使乙醇在培养基内的终浓度分别为1.5 g/L和3.0 g/L,对照组培养基中加入等量的PBS,体外培养24h。用Western Blot技术检测BDNF、Sortilin和p75NTR的表达;用IF技术检测乙醇对海马神经元形态的影响以及神经元内BDNF、Sortilin和p75NTR的表达及定位。研究结果1.IF结果显示,与对照组相比,乙醇处理组海马神经元数量显著减少（1.5g/L Et OH vs.Control,P<0.01;3.0 g/L Et OH vs.Control,P<0.01）,细胞胞体出现肿胀,一级树突数量减少（1.5 g/L Et OH vs.Control,P<0.01;3.0 g/L Et OH vs.Control,P<0.01）,各级树突长度缩短（1.5 g/L Et OH vs.Control,P<0.001;3.0g/L Et OH vs.Control,P<0.0001）。与1.5 g/L乙醇浓度组相比,3.0 g/L乙醇浓度组一级树突的数量和各级树突的长度变化不明显（P>0.05）。2.WB结果显示,与对照组相比,1.5 g/L乙醇浓度组和3.0 g/L乙醇浓度组海马神经元内BDNF蛋白表达显著降低（1.5 g/L Et OH vs.Control,P<0.01;3.0 g/L Et OH vs.Control,P<0.0001）;Sortilin蛋白表达显著升高（1.5 g/L Et OH vs.Control,P<0.01;3.0 g/L Et OH vs.Control,P<0.001）;p75NTR蛋白表达显著升高（1.5 g/L Et OH vs.Control,P<0.05;3.0 g/L Et OH vs.Control,P<0.01）。与1.5 g/L乙醇浓度组相比,3.0 g/L乙醇浓度组BDNF、Sortilin和p75NTR的表达变化不明显（P>0.05）。3.IF结果显示,与对照组相比,1.5 g/L乙醇浓度组和3.0 g/L乙醇浓度组海马神经元内BDNF定位于细胞质,蛋白表达显著降低（1.5 g/L Et OH vs.Control,P<0.05;3.0 g/L Et OH vs.Control,P<0.01）;Sortilin定位于细胞膜,表达显著升高（1.5 g/L Et OH vs.Control,P<0.05;3.0 g/L Et OH vs.Control,P<0.001）;p75NTR定位于细胞膜,表达显著升高（1.5 g/L Et OH vs.Control,P<0.01;3.0 g/L Et OH vs.Control,P<0.01）。与1.5 g/L乙醇浓度组相比,3.0 g/L乙醇浓度处理组BDNF、Sortilin和p75NTR的表达变化不明显（P>0.05）。结论1.乙醇诱导海马神经元数量下降,树突数量减少,树突长度缩短。2.乙醇作用后海马神经元内BDNF的表达降低、Sortilin和p75NTR的表达升高。