沈阳地区肺炎支原体23SrRNA基因突变及其所致肺炎的临床分析

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目的:了解沈阳地区肺炎支原体23SrRNA基因突变现状,分析肺炎支原体23SrRNA耐药基因突变所致患儿的临床特点及应用大环内酯类抗生素治疗是否有效,提高对突变肺炎支原体所致肺炎的临床认识和诊治水平。   材料与方法:   一、实验材料   标本来自中国医科大学附属盛京医院儿科呼吸疑似MP肺炎的患儿咽拭子。MP核酸荧光探针定量检测试剂盒,肺炎支原体抗体诊断试剂盒,巢式PCR相关试剂。常用实验设备如BECKMAN台式低温高速离心机、PCR循环仪、SLAN荧光定量分析仪.超净工作台等;常用数据库及分析软件如基因组数据库、凝胶成像及扫描分析软件、引物设计软件等。   二、实验方法   应用荧光探针定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术进行MP-DNA鉴定阳性,同时用颗粒凝集(PA)方法检测血清肺炎支原体抗体,MP-Ab≥1:160或对比2次采血抗体滴度4倍以上增高为阳性。以MP阳性的标本作为模板,应用巢式PCR技术进行MP23SrRNA目的片段扩增,对于扩增阳性终产物经纯化后作双脱氧末端终止法全自动DNA测序(纯化和测序由南京金斯瑞生物技术公司ABI3730XL型测序仪完成),将测得序列与美国国立生物信息中心(NCBI)检索的MP23SrRNA基因序列作比对,从而找到突变位点。整理突变肺炎支原体所致肺炎患儿的临床资料,对其临床特点进行总结和分析。   结果:180例住院患儿FQ-PCR和PA法检测肺炎支原体均为阳性共52例,应用巢式PCR扩增23SrRNA测出基因序列45例,另7例基因测序图表现为乱码,未能测出基因序列;45例均存在大环内酯类抗生素耐药基因突变,且变异基因位点均为2063位A→G的点突变,其中2例为2063位点A/G双峰;临床特点表现为91.1%患儿持续性发热伴咳嗽,以中、高度热为主。68.9%外周血白细胞总数正常,CRP多数正常或轻度升高;45例患儿肺部影像,双肺炎症14例,大叶性肺炎7例,伴胸腔积液6例。20例有肺外合并症;45例应用红霉素静注治疗有效率91.1%。   结论:沈阳地区肺炎支原体大环内酯类抗生素作用位点之一23SrRNA2063位点普遍存在突变,其所致肺炎的临床表现无特异性;应用大环内酯类抗生素治疗91.1%有效,肺炎支原体此位点突变与其在体内是否耐药尚需进一步研究。
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