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艾滋病是由人免疫缺陷病毒(HIV)引起的人类免疫缺陷综合症。目前FDA批准的用于临床的抗HIV的药物只是逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂,这两类药物在艾滋病的治疗方面已经取得了巨大的进展。但由于病毒基因的变异,导致了耐药株的出现,导致常规治疗方案失效。因此研究新的抑制剂对于抑制HIV病毒在体内的复制具有重要意义。HR212是由本实验室构建的一种膜融合抑制剂,前期研究证实此蛋白能够有效的抑制HIV-1假病毒感染细胞,并且其结构稳定,能耐受蛋白酶酶切作用。此蛋白具有和T20相似的抗病毒活性,且能够对T20耐药株也具有良好的抑制效果。HR212除了能够抑制HIV-1外,还对HIV-2具有部分抑制效果。前期HR212是以融合表达的形式进行表达的,由于其氨基端存在非目的片段,故不能正确表明其膜融合性质。为向将来的药物临床应用提供资料,我们拟非融合表达了HR212,同时也检测HR212的免疫原性。将HR212基因连接于pBV220上,经诱导表达、纯化后免疫小鼠。经间接ELISA验证HR212按照传统方法免疫能够得到抗体滴度,而以10倍治疗剂量按照治疗程序多次注射时,却仅在1/1000时检测到抗体滴度,此结果为下一步降低其免疫原性的方法探讨具有重要意义。此外,为了研制治疗性疫苗,我们构建了HR212的腺病毒表达体系。通过将HR212连接到穿梭质粒pDC315上,然后与骨架质粒共转染239细胞,经过7天后获得具有复制缺陷的重组腺病毒rAd-TPA-HR212。经Western Blot验证,成功得到了13.3 kd的目的蛋白。经假病毒抑制试验证实,经腺病毒表达的HR212能有效的抑制假病毒介导的膜融合过程。为下一步研究奠定了基础。人工构建的五螺旋蛋白(5-helix)能够抑制HIV介导的膜融合过程中发卡三聚体的形成,从而抑制病毒感染靶细胞。但5-helix基因在原核细胞中直接表达时易形成包涵体,复性困难,给研究带来不便。通过同源建模,模拟了5-helix在pGEX-6P-1载体及pET44b载体上的融合蛋白形成的最有可能的两种构象。通过对比发现,其在pET44b载体中与NusA的融和蛋白的溶剂化能远大于在pGEX-6P-1中的GST蛋白,并且酶切位点位于蛋白表面。因此我们将HR212连接于pET44b上,构建重组载体pET44b-PSP-5Helix,经转化、诱导、纯化后,经HIV假病毒抑制试验证明,此蛋白具有明显的抑制HIV假病毒的活性。