牡丹草次级代谢产物抗植物病原菌及抗氧化活性研究

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天然产物在食品、医药和农业等领域发挥着不可替代的作用。小檗科植物因富含活性物质而广受关注,本文选用小檗科植物牡丹草(Gymnospermium micro rrhynchum(S.Moore)Takht.)为研究对象,进行次生代谢产物的提取分离,并探究其抗植物病原菌活性和抗氧化活性。分别取牡丹草的根和茎部分研磨成粉,通过超声辅助浸提得到粗提物。选用生长速率法评价牡丹草根、茎提取物对玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica),稻瘟菌(Magnaporthe oryzae),禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum),灰葡萄孢(Botrytis cinerea)的抑制活性。以宁南霉素为阳性对照组,使用半叶枯斑法探究牡丹草根粗提物的抗烟草花叶病毒活性。结果表明,牡丹草根、茎提取物对稻瘟菌有抑制活性,抑制率分别为46%和37%。牡丹草根粗提物可以减少烟草花叶病毒侵染引起的枯斑个数,对发病率的抑制率为21.21%。选用DPPH自由基清除法检测并比较牡丹草根提取物和牡丹草茎提取物的抗氧化活性。牡丹草根提取物和茎提取物均具有良好的抗氧化活性且牡丹草根提取物的抗氧化活性更加显著。将根提取物利用有机溶剂分级萃取得到三部分极性萃取物(石油醚相,乙酸乙酯相,正丁醇相),并采用DPPH法比较三个部分的抗氧化活性,发现乙酸乙酯相和正丁醇相的抗氧化活性较为突出。将色谱分离技术和DPPH自由基清除法相结合,对乙酸乙酯相和正丁醇相中的有效成分跟踪分离。使用波谱解析方法进行化合物结构鉴定,最终鉴定出非洲防己碱(palmatin e),3-O-β-d-glucopyranosyl-30-[32,33,34-trimethylpentyl]-16-ene-hopan,butyl-α-D-glucopyranosiden,n-butyl-β-D-fructopyranoside,β-谷甾醇(β-Sitosterol),异香草酸(isovanillic acid),香草醛(vanilline),胡萝卜苷(daucosterol)八种化合物。检验所得到单体化合物的抗氧化活性,发现八种化合物均具有抗氧化活性,其中palmatine活性高于Vc阳性对照组。通过MTT法检测化合物对SH-SY5Y细胞的细胞毒性,使用H2O2建立SH-SY5Y细胞氧化损伤模型,探究化合物对氧化损伤细胞SOD活力的保护作用。结果显示,palmatine在浓度低于20μg/m L时,对SH-SY5Y细胞有极轻微毒性,3-O-β-d-glucopyranosyl-30-[32,33,34-trimethylpentyl]-6-ene-hopan浓度低于100μg/m L时,有极轻微毒性,n-butyl-β-D-fructopyranoside在浓度低于20μg/m L时无细胞毒性。且palmatine、n-butyl-β-D-fructopyranoside在浓度低于50μg/m L时,用其处理后的氧化损伤细胞SOD活力水平明显提高。本研究揭示了牡丹草次生代谢产物作为抗氧化剂,抗菌剂的潜力。当下,牡丹草资源尚未得到有效的开发利用,该工作将为后续的相关研究提供有价值的参考。
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