论文部分内容阅读
目的: 近几年来,在肝脏保护研究领域兴起的药物预处理方法越来越受到重视。一些麻醉药预处理的肝保护作用已被研究证实。鉴于地氟醚的临床应用前景,研究地氟醚预处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用具有重要的科学意义和临床应用价值。本实验采用大鼠肝脏缺血再灌注模型,旨在探讨:地氟醚预处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及其部分机制,为深入研究吸入性麻醉药对肝脏缺血再灌注的影响奠定一定的基础。 方法: Wistar大鼠72只,随机分为:(1)正常对照组(N组,n=8):动物不接受任何处理;(2)单纯缺血再灌注组(IR组,n=32):阻断入肝血流90min后松开无创动脉夹,恢复入肝血流,分别于再灌注后1、3、6、及24h各时相点活杀动物取材,每时相点观察8只动物;(3)地氟醚预处理组(Des组,n=32):阻断入肝血流前,将动物置入与麻醉机(OhmedaExcel 210)回路相连的密闭容器内,以2L/min氧流量流经地氟醚蒸发罐,蒸发罐开启浓度为6%,容器出气口连接Solar 8000M型麻醉气体监测仪,测定地氟醚浓度达6%后维持30min,进行预处理后洗脱10min。其余步骤同缺血再灌注组。所有动物于实验结束经下腔静脉采血,离心析出血清用于测定生化指标;无菌留取肝组织液氮冻存待检。肝组织切片,光镜下观察肝组织病理形态改变。血清ALT、AST使用Beckman CX7全自动生化分析仪测定;肝组织采用硫代巴比妥酸法比色法测定MDA;黄嘌呤氧化酶法测定SOD;二硫代二硝基苯甲酸法测定GSH;采用生物发光法测定组织内ATP含量;采用甲基百里香酚蓝比色法测定肝组织钙含量;肝组织Ca2+-ATP酶活性测定用化学比色法进行,具体操作按南京建成生物工程研究所提供的试剂盒说明书进行。 结果: (1)肝功能、肝脏组织病理变化:缺血再灌注后Des组和IR组的血清AST、ALT酶水平与N组比较均明显升高(p<0.01)。经过地氟醚预处理之后,Des组在各时相点上均低于IR组,ALT和AST的水平与IR组的差异有显著性意义(P<0.05)。光镜下在各时相点上,Des组组织病理损害明显轻于IR组,再灌注24h病理切片肝组织损伤分级,属于Ⅱ~Ⅲ级范畴的动物数:IR组肝组织损伤Ⅲ级8例;Des组Ⅲ级只有一例,与IR第三军医大学硕士学位论文组比较显著降低(P<0.05);其余均为11级,与IR组比较显著升高(P<0.05)。(2)肝组织氧自由基变化:SOD检测:IR组与N组比较,SOD活性下降均非常明显(P<0.05);Des组与IR组相应时相点比较SOD活性均上升,差异显著(P<0.05)。MDA检测:IR组和Des组的MDA含量在再灌注各时相点与N组比均明显升高(P<0.05),而在再灌注的各时相点Des组明显低于IR组,差异显著伊<0.05)。GSH检测:Des组、IR组与N组比较,GSH含量下降明显(P<0.05);而在再灌注的各时相点Des组明显高于IR组,差异显著(P<0.05)。(3)肝组织ca2+、c扩+一ATP酶和ATP含量变化:各手术组动物ATP含量和ca2+一ATP酶活性于再灌注时显著低于N组(P<0.05),随着再灌注时间的延长,ATP含量及ca2+一ATP酶活性均有所恢复。Des组显著高于IR组(P<0.05)。各手术组动物肝组织ca2+含量在再灌注早期均高于N组少<0.05),而在再灌注24h无显著差异(P>0 .05),在1、3、6h3个时相点上,IR组显著高于Des组伊<0.05)。 结论: 1.地氟醚预处理(l MAC,30而n)可诱导肝脏缺血耐受而产生肝脏保护作用。 2.地氟醚预处理(l MAC,30而n)能够对抗缺血再灌注时氧自由基对肝脏的损伤,在降低自由基的含量和维持组织超氧化物歧化酶活力方面有重要作用。 3.地氟醚预处理(l MAc,30n五n)促进肝脏缺血再灌注期间A开的形成,ca2+一ATP酶活性恢复,减轻肝细胞内c扩+超载,这可能是其发挥肝缺血再灌注保护作用的机制之